一站式植物mRNAOUT产品及特点
构建cDNA文库、蛋白质的体外翻译和RT-PCR方法检测稀有的mRNA等研究常常需要从总RNA中分离mRNA,mRNA只占总RNA的1%左右,但由于带poly(A)尾巴,所以可以通过与Oligo(dT)纤维素的亲和结合而与其他RNA(如rRNA、tRNA等)分离开。本产品专门用于从植物组织中一站式提取mRNA,其操作如下:
它具有下列特点:
1. 一站式,是由的GX、无多糖柱式植物RNA提取试剂和mRNA提取试剂两个产品整合而成,即开即用,非常方便。
2. 一次可以处理50-500 mg的植物组织,能得到约10-15 μ g总RNA,从中可得0.1-0.5 μg左右的mRNA。
3. Oligo(dT)纤维素吸附能力强,每克可以吸附50-80 OD的mRNA,相当于2000-3000 μg mRNA。
4. mRNA提取过程操作简单,只需要离心就可以完成,免去了常规的灌柱、洗柱
等繁琐操作。
5. 得到的mRNA可以直接用于构建cDNA文库、蛋白质的体外翻译和RT-PCR。
使用及效果
1. 用植物RNAOUT的方法提取植物总RNA,用50 μ L洗脱,将两管收集在一起,共得到100 μ L总RNA(详见柱式植物RNAOUT的使用手册)。
2. 从总RNA中纯化mRNA:将0.5 mL 溶液A(结合液)加入到一管装有Oligo(dT)纤维素的离心管中,放置5分钟后离心吸弃上清后待用。将制备的总RNA100 μ L加热到65℃ 5分钟后加入等体积的溶液A,转移到装有Oligo(dT)纤维素的离心管中,颠倒混匀数次,离心后将上清转移到一个离心管中。用0.5 mL溶液A,混匀后4℃ 200 g 离心5分钟,小心弃上清。重复上步洗3-5次。用RNase-free水洗脱mRNA。
3. 用微量核酸沉淀剂沉淀mRNA(详见微量核酸沉淀剂使用手册)。
注:所得mRNA只占总RNA的5%左右,很微量很珍贵,一般不宜电泳检测。
一站式植物mRNAOUT产品及特点
由于血液富含RNase,因此血液RNA非常容易降解,是临床分子生物学研究中的一个棘手的问题。为解决此问题,本公司在非冻型组织RNA保存液的基础上,开发了本产品,它具有下列特点:
1. 能快速渗透到新鲜血液细胞内,YZRNA分子的降解。保存的血液RNA常温可放置3天,4℃可放置5天,-20℃可放置3个月。
2. 操作简单,直接将本产品和新鲜血液细胞沉淀按比例混合即可。
3. 适用于人新鲜血和哺乳动物新鲜血液,不适用于陈旧血液和冻凝血液,也不适用于禽类血液和其他动物血液。
4. 重复性好,效果跟进口同类产品相当。
5. 保存的样品可直接用本公司血液RNAout提取RNA。
一站式植物mRNAOUT使用及效果
将本产品与新鲜血液样品按4:1的比例(4份本产品加1份新鲜血液)混合后即可放置。放置结束后将样品转移到离心管中,5000 g室温离心1分钟,小心吸出浅粉红色的上清液,棕红色沉淀(血细胞和蛋白沉淀)直接用于后续的总RNA提取。
1. 新鲜细胞:如果试剂没有问题,且外源性污染也可以排除,那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如果将裂解液直接加入培养皿中裂解细胞,一定要使裂解液能覆盖住细胞。
2. 新鲜组织:某些富含内源核酸酶的样品(如肝脏,胸腺等),即使使用电动匀浆器匀浆也不能避免RNA的降解。一站式植物mRNAOUT更可靠的方法是:在液氮条件下将组织研碎,并且匀浆时使用更多裂解液。
3. 冷冻样品:样品取材后应立即置于液氮中速冻,然后移至-70℃冰箱保存。样品决不能未经液氮速冻而直接保存于-70℃冰箱中。冷冻样品,即使是冷冻细胞,如果不在液氮条件下研磨碎,而直接加入裂解液中匀浆,RNA也比新鲜样品更容易降解。样品在与裂解液充分接触前决不能出现融化,所以研磨用具必须预冷,在碾磨过程中要及时补充液氮。样品研碎后,在液氮刚刚挥发完时,将样品迅速转移到含裂解液的容器中,立即混匀匀浆。
4. 外源RNA酶的污染:试剂,器械及实验环境中的RNA酶进入实验系统,可考虑华越洋产品:外源RNA酶清除剂(RNase remover)解决。
5. 内源RNA酶的污染:YZ剂失效或者用量不够,实验样品过多;匀浆时温度过高。
一站式植物mRNAOUTRNA提取得率低
1. 该组织或者细胞中RNA含量偏低:不同细胞和组织中RNA的丰度不同,如肝脏,,心脏等是高丰度组织(总RNA含量2-4μg/mg),脑,胚胎,肾脏,肺,胸腺,卵巢等是中丰度组织(总RNA含量0.05-2μg/mg),膀胱,骨,脂肪等是低丰度组织(总RNA含量<0.05μg/mg)。
2. 组织起始量太少或者太多:样品量过少,则细胞组织中RNA含量较低;样品量过多则可能超过裂解液的裂解能力,裂解将不完全,从而导致RNA得率低。
剂盒50次XY101114通用型RT-LAMP试剂盒50次XY130923LAMP扩增阳性对照50次XY130833LAMP可见光染料1mLXY131179核酸稀释液,测OD专用100mLXY131083Ribo-SPIA cDNA 扩增试剂盒20次XY91106T7体外转录试剂盒50次(A)|50次(B)XY91107SP6体外转录试剂盒50次(A)|50次(B)XY91108T3体外转录试剂盒50次(A)|50次(B)XY130694m7G(5′)ppp(5′)G 帽结构类似物25ODXY130695m7G(5′)ppp(5′)A 帽结构类似物25ODXY130696G(5′)ppp(5′)A 帽结构类似物25ODXY130697G(5′)ppp(5′)G 帽结构类似物25ODXY1306983′-O-Me-m7G(5′)ppp(5′)G 帽结构类似物25ODXY70906NTP溶液,10 mM0.5mLXY12062TP溶液,100mM0.25mLXY120626UTP溶液,100mM0.25mLXY120628GTP溶液,100mM0.25mLXY120627CTP溶液,100mM0.25mLXY130832通用型MLPA试剂盒20次XY130551单细胞RNA扩增试剂盒80次XY130803单细胞裂解液(DNA)1mLXY130804单细胞裂解液(RNA)1mLXY130805单细胞悬浮液1mLXY130806胚胎裂解液1mLXY131128动物种属鉴定PCR Mix100次XY131129植物种属鉴定PCR Mix100次XY131130真菌种属鉴定PCR Mix100次XY131131细菌种属鉴定PCR Mix100次XY30常用PCR引物100uL
基因结构和功能
XY100212 一管式点突变试剂盒 10次
XY130823 多点突变试剂盒 20次