定量PCR,WB，柯达5*7胶片/暗盒,8%预制胶_详细资料

产品信息

荧光定量PCR技术服务

用Taqman方法对DNA/RNA进行Real Time PCR的定量测定的鉴定。

用Taqman方法对DNA/RNA进行Real Time PCR的定量测定或型的鉴定。详情如下：

服务要求：

1、请您提供新鲜的且尽量多的材料，或直接提供纯化好的总RNA或DNA（大于5ug/样品）。每份材料最少应提供100mg/样品。

2、请通过E-mail提供已知的全长因序列。

3、请提供详细背景资料：DNA/RNA来源、丰度等。

操作程序：

1、根据基因序列设计特异性的引物和荧光探针；

2、提取DNA/RNA；

3、Real Time PCR，进行实验结果分析；

4、实验完成后，提供完整的实验报告（含软件分析结果）及引物等实验材料。

收费标准：

1、RNA提取费用：

小于20个样品：150元/个；

20－30个样品：120元/个；

30个以上样品：100元/个；

2、PCR反应费用：

一个指标每个样品为150元；

二个指标每个样品为240元；

三个指标每个样品为300元；

四个指标以上每个样品为80元/反应。

3、引物和探针序列设计：免费（客户只需提供genebank的ID号或指标名称）。

4、引物和探针合成费用：

引物合成2.00元/bases；探针标记为1200元/条。

5、内参引物探针：免费。

Western Blot免疫印迹技术服务

免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(western blot)，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹(western blot)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹(western blot)常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。

服务要求：

1.      样品要求：

组织样品：每份样品约（250~500mg）新鲜或正确保存的,

细胞样品：每份样品约1×10⁶～1×10⁷细胞数

2．客户需提供有效的一抗，或由公司代购进口原装抗体，

3．客户需提供欲检测目的蛋白的详细背景资料。

操作程序：

1．总蛋白制备

2．比色法测定蛋白含量

3．变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE) 凝胶电泳，分离蛋白质

4．蛋白质转印电泳印迹法

5．固相免疫检测：封闭、一抗杂交、二抗杂交

6．化学发光法检测：显色、曝光、显影定影

7．结果数据分析：胶片扫描，软件分析

8．提供实验报告，包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关图表。

收费标准：

每张膜上做一种目的蛋白和相应的内参蛋白。每张膜上可以做8个样品（样品数小于8个按8个计）。每张膜的费用是：1500.00元。一抗另计，其它试剂免费，一抗订购时间约为3周。

时间：约2－3周（不包含代购抗体的时间）。

DNA测序服务

样品类型

相应要求

菌体

1. 说明载体抗性类型，我们提供 Amp, Kan, Tet 及 Chl 四种抗生素。
2.   提供 1ml 左右过夜培养的菌液，加 15% 灭菌甘油，于 Eppendorf 管中封口保存，防止交叉污染或渗漏。
3.   大量样品测序，建议在一次性塑料培养皿固体培养基上穿刺培养。
4.   建议尽量提供穿刺培养的菌种。

质粒

1. 质粒溶于适量体积双蒸水中（不含 TE ），电泳检测总量大于 2mg 。

2. 建议用相关试剂盒纯化。
3. 如有可能，同时提供 1ml 含有相应质粒的菌液备用。
4. 大质粒必需注明载体长度。

未纯化 PCR 产物

1. 片段大于 150bp 。
2. 提供 50ul ～ 100ul PCR 扩增产物 ( 总量 500ng-1ug) 。
3. 取 3ul 样品，电泳检测应为明亮的一条带，无杂带。

纯化 PCR 产物

1.PCR 产物溶于双蒸水中（不含 TE ）。

2. 浓度大于 20ng/ul ，体积大于 20ul ，长片段需适当增加量。
3. 电泳检测条带专一。

自备的引物

1. 浓度不低于 5pmole/ul( 或 5umol/L) ，体积大于 20ul 。
2. 随机引物和简并引物不能用于测序。
3. 尽可能提供引物全序列、 PCR 退火温度，以供参考。

相关试剂

荧光定量PCR用SYBR Green l (20×)

荧光定量PCR核心试剂盒

RNA提取试剂盒(Trizol)

dNTP脱氧核糖核苷酸, dATP/dGTP/dCTP/dTTP

UNG酶(尿嘧啶DNA糖基化酶) , UDG酶

Western Blot相关的试剂和耗材（柯达5*7胶片、暗盒）

二抗

PAGE预制胶/WB/电泳制胶

本预制胶为PH中性缓冲液制备，可进行天然蛋白电泳，也可进行变性蛋白电泳。适合胶板宽度在10cm的电泳槽。

6% ,8% ,10% ,12% ,15% ,8-16% ,4-16% ,4-12% ,

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定量PCR,WB，柯达5*7胶片/暗盒,8%预制胶

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样品类型	相应要求
菌体	1. 说明载体抗性类型，我们提供 Amp, Kan, Tet 及 Chl 四种抗生素。 2. 提供 1ml 左右过夜培养的菌液，加 15% 灭菌甘油，于 Eppendorf 管中封口保存，防止交叉污染或渗漏。 3. 大量样品测序，建议在一次性塑料培养皿固体培养基上穿刺培养。 4. 建议尽量提供穿刺培养的菌种。
质粒	1. 质粒溶于适量体积双蒸水中（不含 TE ），电泳检测总量大于 2mg 。 2. 建议用相关试剂盒纯化。 3. 如有可能，同时提供 1ml 含有相应质粒的菌液备用。 4. 大质粒必需注明载体长度。
未纯化 PCR 产物	1. 片段大于 150bp 。 2. 提供 50ul ～ 100ul PCR 扩增产物 ( 总量 500ng-1ug) 。 3. 取 3ul 样品，电泳检测应为明亮的一条带，无杂带。
纯化 PCR 产物	1.PCR 产物溶于双蒸水中（不含 TE ）。 2. 浓度大于 20ng/ul ，体积大于 20ul ，长片段需适当增加量。 3. 电泳检测条带专一。
自备的引物	1. 浓度不低于 5pmole/ul( 或 5umol/L) ，体积大于 20ul 。 2. 随机引物和简并引物不能用于测序。 3. 尽可能提供引物全序列、 PCR 退火温度，以供参考。