变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE)分析PCR产物,如果突变发生在ZX解链的DNA区域,检出率可达100%,检测片段可达1kb,最适围为100bp-500bp。变性梯度凝胶电泳法原理基于当双链DNA在。变性梯度凝胶中进行到与DNA变性温度一致的凝胶位置时,DNA发生部分解链,电泳迁移率下降,当解链的DNA链中有一个碱基改变时,会在不同的时间发生解链,因影响电泳速度变化的程度而被分离。由于变性梯度凝胶电泳法是利用温度和梯度凝胶迁移率来检测,需要一套专用的电泳装置,合成的PCR引物在5`末端加一段40bp-50bp的GC夹,以利于检测发生于高熔点区的突变。
DGGE的应用:
环境样品细菌、古细菌、真菌、真核微生物的多样性分析(土壤、水等样品无需培养,直接提取DNA扩增检测)动、植物体内外共生微生物的检测;食品微生物的检测;医学领域碱基突变的检测,杂合子检测等等。
实验流程:
DNA样品的提取→ PCR扩增→ DGGE电泳→ 带型分析→ 特征条带的测序
特点:
两段程控,每段最长时间24小时,控制精度1秒
电压范围0-200V,精度0.1%,电流范围0-150mA,纹波系数0.1%
微电脑智能控制,具有过压、过流、过载和报警等装置
铂金电极插座裹覆于安全覆盖内,避免意外触及,降低Buffer因高温蒸发
Buffer槽体,以玻璃材质制成,于电泳作业时,不因高温变形
完善的Heater/Stirrer/Buffer Cycler组件设计,使温度分布均匀达±0.2ºC
其中Buffer Cycler设计,无需额外的蠕动泵,Buffer循环效既可达ZJ状态
高精度和高可靠性,能对单碱基突变进行检测
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