肝脏磷酸果糖激酶(PFKL)免疫组化试剂盒大鼠样本检测

肝脏磷酸果糖激酶(PFKL)免疫组化试剂盒大鼠样本检测产品规格：50T/100T圻明生物现货供应。产品仅供科研实验，不用于临床诊断依据。
免疫组织化学技术是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、同位素等，显示一定的颜色。借助显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察其颜色变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的一门新兴组化技术。

在病理学研究中，免疫组化技术的作用和意义颇为重要。免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到普遍认可，其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时，准确率可达50-75%。

组织的固定：病理学研究和免疫组化实验中，组织的固定是非常重要的一步。将目的组织放于某些化学试剂中，使组织中的细胞物质接近于具有生命功能时的结构和形态称为固定。组织固定还要减少外源性和内源性分解酶的作用，防止细胞自溶等，从而保持组织和细胞内的抗原性，使抗原不失活。

肝脏磷酸果糖激酶(PFKL)免疫组化试剂盒大鼠样本检测组织固定步骤
1.从动物体内取出相应组织，放入4%多聚甲醛，此时4%多聚甲醛混有血等杂质，将该组织放入一杯新鲜的4%多聚甲醛中，如此再三，操作三次后，用保鲜膜封闭固定皿后室温孵育5分钟，将其放于4℃冰箱，过夜孵育。
2.次日，去掉4%多聚甲醛，将该组织放入新鲜的0.1MPBS中孵育30分钟后，将该组织放入新鲜的0.1MPBS中孵育30分钟。
3.弃掉PBS，将该组织放入70%的乙醇中，孵育1小时。
4.弃掉70%乙醇，将该组织放入80%的乙醇中，孵育1小时。
5.弃掉80%乙醇，将该组织放入90%的乙醇中，孵育1小时。
6.弃掉90%乙醇，将该组织放入95%的乙醇中，孵育1小时。
7.弃掉95%乙醇，将该组织放入100%的乙醇中，孵育1小时。
8.弃掉100%乙醇，将该组织放入100%的乙醇中，孵育1小时。
9.弃掉100%乙醇，将该组织放入100%的乙醇中，孵育1小时。
10.弃掉100%乙醇，将该组织放入二甲苯中，透明30分钟。
11.弃掉二甲苯，将该组织再次放入新鲜二甲苯中，透明30分钟。
12.弃掉二甲苯，将该组织放入热熔的石蜡中，包埋该组织。
13.待热熔的石蜡凝固，即可取出包埋块，备用或者切片。

注意事项：
1.固定组织时，必须有足够的固定液，一般为组织体积的10-15倍。
2.固定组织要新鲜，组织取材后立即固定。
3.组织块的体积应该小而薄，一般免疫组化组织大小为1.0㎝×1.0㎝×1.0㎝×0.2㎝。
4.固定效果随温度升高而加强，一般在-70℃~30℃之间。
5.10%中性甲醛和4%多聚甲醛适合于固定，37℃或者常温固定，适合于许多蛋白质、抗原，能保持其与抗体的反应能力。
6.组织越大，固定时间越长。固定时间与温度成反比，以实际情况为准。

肝脏磷酸果糖激酶(PFKL)免疫组化试剂盒大鼠样本检测石蜡包埋组织切片免疫染色
实验步骤（建议方案）：
石蜡包埋组织切片免疫染色
实验步骤（建议方案）：
石蜡包埋组织切片 3~4μm 厚度
1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于 60℃恒温烤箱中至少烤 1 hr；
2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；
3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85%乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×2min；
4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到 98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×
2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修FF法见附 1）* 注：有些抗原勿需修复，直接进入第 5 步封闭。
5.封闭： 滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 30 min；
6.加一抗：滴加用试剂 C（即用型一抗），37℃湿盒孵育 2 hr 或 4℃过夜；
7.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；
8.封闭： 滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 10 min；
9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂 D），37℃湿盒中孵育30 min；
10.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；
11.封闭： 滴加试剂 Tween 20，37℃湿盒孵育封闭 20 min；
12.加 HRP-SA： 滴加用抗体稀释液稀释的试剂 E（1：50~200，终浓度 5~20 nM），37℃湿盒中孵育 30 min；
13.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min），TBS 洗涤（2×5 min）；
14.显色：应用 DAB 溶液（试剂 F）显色；
15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；
16.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；
17.观察成像： 显微镜下观察成像。

The protocols of immunohistochemistry Staining

1. Deparaffinize and dry array slide as referred to in protocol of deparaffinization.
2. Rinse array slide twice with PBS for 5 min each.
3. (Optional) The endogenous peroxidase activity is blocked at room temperature by a 5~10 min incubation in the final developmental 3% H2O2 in distilled water or
PBS (pH 7.4).
4. Rinse array slide in PBS for 5 min.
5. Antigen retrieval.
6. Rinse array slide in PBS for 5 min.
7. Apply the blocking antibody (normal goat serum), incubate for 20 min at room temperature, and throw off residual fluid (don't wash.).
8. Apply the primary antibody 60 min.at RT or 4oC.
9. Rinse array slide twice for 5 min each.
10. Incubate array slide with a biotin-conjugated secondary antibody at 20~37°C for 20 min.
11. Rinse array slide twice for 5min each.
12. Incubate array slide with SABC reagent at 37°C for 20 min.
13. Rinse array slide 4 times for 5 min each.
14. Proceed with chromogen of final developmental DAB or use DAB Kit(Control the degree of staining with regular microscopy).
15. Wash array slide in distilled water.
16. Stain and differentiate array slide in hematoxylin.
17. Dehydration and transparency of array slide.
18. Mount array slides.