cDNADY链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)多少钱

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名称：cDNADY链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)多少钱
编号：BTN60906
产地：国产|进口
品Pai：百奥莱博
规格：50次
本试剂盒提供合成cDNADY链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)GX合成mRNA的全长cDNA拷贝。

产品特点：
1. 使用突变的反转录酶，内源RNase H活性低。
2. 最长可合成13Kb的cDNA。
3.可以使用oligo-dT、随机引物和RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提供)。
4. 总RNA、poly(A)+RNA或特殊RNA 均可作为模板。
5.可用于cDNA文库构建、RT-PCR、探针标记等。

试剂盒组成：

 

成分	规格
MMLV(含RI)	100μl
RT Buffer(含dNTP)	300μl
Oligo(dT)18引物(0.5μg/μL)	50μl
Random Primer(0.2μg/μL)	50μl
RNase-free水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：合成PCR用的1st-strand cDNA
1. 按下表配制RT反应体系：

RNA 模板
总RNA	100-500ng
或poly(A)mRNA	10-500ng
或专一的RNA	0.01pg-500ng
注意：RNA样品不能含有基因组DNA污染。

引物

Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μl
或随机引物(0.2μg/μL)	1μl
或RNA 模板专一性引物	15-20 pmol
注意：随机引物与RNA 模板的比例跟cDNA 合成的平均长度成反比。
RNase-free水	补水到13μL

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μl RT Buffer(含dNTP)。
4. 37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA 模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则改成25℃ 5分钟。
5. 加入2μL MMLV逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。此步为RT反应。
7. 70℃保温10分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR 模板使用，不需要纯化。

二：合成建文库用的1st-strand cDNA
1. 按下表配制RT反应体系:

RNA模板
poly(A)mRNA	1μg
或专一的RNA	0.5-1μg
注意：RNA样品不能含有基因组DNA污染。
引物
Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μl
或随机引物(0.2μg/μL)	1μl
或RNA模板专一性引物	100 pmol
注意：随机引物于RNA模板的比例跟cDNA合成的平均长度成反比。
RNase-free水	补水到13μL

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μl RT Buffer(含dNTP)。
4. 37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则改成25℃ 5分钟)。
5. 加入2μl MMLV逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。此步为RT反应。
7. 70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以用于第二链cDNA的合成或放置在-20℃长期保存。

三：用对照模板合成cDNA(需要用同位素，需要对照的客户需要单独跟我司联*(代"系"))
1. 按下表配制RT反应体系:

对照RNA模板(0.5μg/μL)	2μl 引物
Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μl
或随机引物(0.2μg/μL)	1μl
或对照专用引物	2μl
RNase-free水	补水到13μl

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μL RT Buffer(含标记dNTP，本试剂不提供)。
4. 37℃保温5分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是25℃。
5. 加入2μL MMLV 逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。
7. 加1μL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8.电泳检测。合成的cDNA的量一般有加入RNA总量的50%以上，电泳一般能出现1.1Kb的片段(如果使用随机引物，将出现多个小片段)。

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