蛋白酶YZ剂混合物(真菌或酵母蛋白提取用) 蛋白质研究

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名称：蛋白酶YZ剂混合物(真菌或酵母蛋白提取用) 蛋白质研究
品Pai：百奥莱博
英文名：Protease inhibitor cocktail for fungal and yeast extracts
编号：RFT197
规格：1ml|5×1ml
本品是一种用于真菌或酵母蛋白提取的蛋白酶YZ剂混合物(100mM AEBSF，1.5mM E64，2mM Pepstatin A，500mM Phenanthroline in DMSO)。一个包装的本产品通常足够用于100ml裂解液的配制。

真菌或酵母提取物中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰，从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等YZ剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。

本产品为经优化和测试的用于真菌或酵母蛋白提取的蛋白酶YZ剂混合物，包含了广谱的丝*酸、半胱*酸和酸性蛋白酶YZ剂、以及金属蛋白酶YZ剂。

本产品使用便捷，通常以1:100的比例把蛋白酶YZ剂混合物加入裂解液中，即可用于真菌或酵母蛋白的提取，并有效YZ蛋白降解。

本产品可以有效YZ真菌或酵母提取物中的各种蛋白酶活性，如丝*酸蛋白酶、半胱*酸蛋白酶、苏*酸和天冬*酸蛋白酶、金属蛋白酶等。其中AEBSF是一种水溶性的丝*酸蛋白酶不可逆YZ剂，其YZ常数与PMSF和DFP的YZ常数相似，可以有效YZ胰蛋白酶(trypsin)、糜蛋白酶(chymotrypsin)、纤溶酶(plasmin)、激肽释放酶(kallikrein)和凝血酶(thrombin)等蛋白酶，作为PMSF和DFP的替代物，AEBSF的毒性更低、水溶性和水溶液稳定性更好。E64是半胱*酸蛋白酶不可逆YZ剂；Pepstatin A是天冬*酸蛋白酶可逆YZ剂；Phenanthroline是金属蛋白酶的可逆YZ剂。

使用方法：

1、本蛋白酶YZ剂混合物为100×的储存液，使用时按照1:100的比例加入到裂解液中(例如，1ml裂解液中加入10μl蛋白酶YZ剂混合物)，混匀后即可使用。含有蛋白酶YZ剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。
2、待所需的YZ剂添加完毕混匀后，就可以开始进行常规细胞或组织的裂解和蛋白提取。

储存条件：-20℃，有效期12个月。

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53597-25-4 Protamine sulfate sale 硫*(代"酸")鱼精蛋白
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·高保真平末端pfu DNA聚合酶
编号：RFT101
英文名称：pfu DNA Polymerase
规格：100U(40μl)|5×100U(5×40μl)
本品是嗜热古细菌来源的DNA聚合酶，该酶除具有5’-3’DNA聚合酶活性外，还具有很强的3’-5’外切酶活性，增强了PCR扩增的保真度。与Taq酶相比，pfu聚合酶热稳定性更好，更能忍耐较高的变性温度。Pfu的保真性是Taq DNA聚合酶的10-15倍。延伸速度为0.5kb/分钟。PCR产物3’端不带碱基A，为平滑末端，要通过平滑末端克隆法进行克隆。适用于高保真的DNA片段的扩增、DNA片段的平滑化。

试剂盒组成：
pfu DNA Polymerase(2.5U/μl)-————————40μl
10×pfu PCR buffer(含Mg2＋)—————————1ml

活性定义：1单位(U) pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

贮存液：50 mM Tris-HCl (pH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50 mM KCl ; Stabilizers; 50% glycerol

使用方法：
1、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系：

 

成分	20μl反应体系	50μl反应体系	终浓度
Template	0.04-0.2 μg	0.1-0.5 μg	as you wish
Primer 1(10μM)	0.4μl	1μl	0.2μM
Primer 2(10μM)	0.4μl	1μl	0.2μM
10×pfu PCR buffer(含Mg2+)	2μl	5μl	1×
dNTP Mixture(10 mM)	0.4μl	1μl	200μM each
pfu (2.5 U/μl)	0.4μl	1μl	0.05U/μl
ddH2O	up to 20μl	up to 50μl	-

注1：如果需要改变Mg2+浓度，根据下表调节

PCR反应体系中Mg2+终浓度	2 mM	2.5 mM	3 mM	4 mM
20μl反应体系中25 mM MgSO4加入量	0μl	0.4μl	0.8μl	1.6μl
50μl反应体系中25 mM MgSO4加入量	0μl	1μl	2μl	4μl

注2：配制反应液时，请ZH加入pfu，因为本酶有很强的3’-5’外切酶活性，有可能降解引物。
2、混匀后，离心快甩将反应液收集到管底。
3、PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。
4、PCR仪上执行以下程序：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	94℃	3-5 min	1
变性	94℃	30 sec	25-40*
退火	50-60℃*	30 sec
延伸	72℃	0.5kb/min*
ZH延伸	72℃	5 min	1

注：PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定ZJ的反应条件(温度、时间等)。

注意事项：
1、pfu 酶具有 3’-5’的外切酶活性，所以 pfu 酶扩增时延伸速度远比 Taq 酶低，应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间，一般情况下 pfu 酶的延伸速度为每分钟 0.5kb；同时 pfu 酶的 3’-5’的外切酶活性可能降解引物，所以应ZH把pfu 酶到反应体系中，并立即进行 PCR 反应。
2、pfu 酶的热稳定性比 Taq 酶好，对于 GC 含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对 pfu 酶的活性无影响。

储存条件：-20℃，有效期一年。

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