RT-PCR是指利用逆转录酶将RNA逆转录(RT)成cDNA(Complementary DNA),然后以cDNA为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增目的片段的技术。
RT-PCR技术可用于检测细胞和组织中基因表达水平,克隆特定基因的cDNA序列和检测RNA病毒。
不同于两步法RT-PCR中RT和PCR分别在两个反应体系中进行的方法,BioRT逆转录扩增(RT-PCR)试剂盒(一步法)采用一步法使RT和PCR在同一反应体系中进行,反应过程中不需要添加试剂。本试剂盒采用美国先进技术生产的高质量转录酶(AMV酶)和高质量Taq聚合酶,并采用特殊的反应体系保证AMV逆转录酶和高质量Taq酶发挥ZD
功效。
AMV逆转录酶可逆转录得到高产量的cDNA,高质量Taq聚合酶采用高纯化的重组Taq聚合酶,两者配合使用可得到长达4kb的产物。
一步法RT-PCR原理示意图
特 点1、高产量 2、高特异性 3、适用范围广 4、检测灵敏度高 5、使用方便灵活 6、避免交叉污染
实验数据: 1、梯度稀释RNA模板用BioRT逆转录扩增(RT-PCR)试剂盒(一步法)进行RT-PCR后电泳结果(450bp)(图1)
2、1μg mouse live total RNA分别用BioRT逆转录扩增(RT-PCR)试剂盒(一步法),I公司一步法RT-PCR试剂盒和P公司一步法RT-PCR试剂盒在50°C和55°C进行RT-PCR后电泳结果(图2)
3、1μg mouse live total RNA用BioRT逆转录扩增(RT-PCR)试剂盒(一步法)进行RT-PCR后电泳结果(图3)
温馨提示:不可用于临床ZL。