试剂盒检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被样本抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成ZZ的黄色。颜色的深浅和样品中的样本呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
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1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1.酶标仪(450nm)
2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,ZZ结果乘以5才是样本实际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成 名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
微孔酶标板 | 12孔×8条 | 12孔×4条 | 无 |
标准品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 无 |
样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
底物A | 6mL | 3mL | 无 |
底物B | 6mL | 3mL | 无 |
终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
注:标准品浓度都不相同,麻烦联系客服索取相应说明书
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
2. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能
1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2. 灵敏度:ZD检测浓度小于(参考说明书)
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6个月
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绵羊葡萄糖磷酸变位酶(PGM)酶联免疫试剂盒
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绵羊抗磷脂酰丝氨酸抗体(APSA)酶联免疫试剂盒
绵羊肌球蛋白重链1(MYH1)酶联免疫试剂盒
绵羊核孔蛋白133kda(NUP133)酶联免疫试剂盒
绵羊磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)酶联免疫试剂盒
绵羊乙酰辅酶A(A-CoA)酶联免疫试剂盒
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绵羊双肾上腺皮质激素样激酶1(DCLK1)酶联免疫试剂盒
绵羊α-胞衬蛋白(SPTAN1)酶联免疫试剂盒
绵羊细胞因子信号转导YZ因子3(SOCS3)酶联免疫试剂盒
绵羊肝脏/红细胞丙酮酸激酶(PK)酶联免疫试剂盒
绵羊肝脏胶原凝集素1(CLL1)酶联免疫试剂盒
绵羊抗磷脂抗体(APA)酶联免疫试剂盒
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绵羊雌激素受体α(ERα)酶联免疫试剂盒
绵羊GATA结合蛋白1(GATA1)酶联免疫试剂盒
绵羊血清淀粉样蛋白A2(SAA2)酶联免疫试剂盒
绵羊硫酸皮肤素(DS)酶联免疫试剂盒
绵羊糖盏蛋白(GC)酶联免疫试剂盒
绵羊C4结合蛋白β(C4BPβ)酶联免疫试剂盒
绵羊泛素蛋白连接酶E3成分N-识别蛋白4 (UBR4)酶联免疫试剂盒
绵羊腺苷三磷酸结合盒转运体G2(ABCG2)酶联免疫试剂盒
绵羊低密度脂蛋白受体(LDLR)酶联免疫试剂盒
绵羊D-乳酸脱氢酶(D-LDH)酶联免疫试剂盒
绵羊神经型一氧化氮合酶(NOS1/nNOS)酶联免疫试剂盒
绵羊蛋白磷酸酶1调控亚基1A(PPP1R1A)酶联免疫试剂盒
绵羊β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)酶联免疫试剂盒
绵羊丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)酶联免疫试剂盒
绵羊晚期糖基化终末产物受体(AGER)酶联免疫试剂盒
绵羊促黄体生成激素(LH)酶联免疫试剂盒
绵羊甘氨酰tRNA合成酶(GARS)酶联免疫试剂盒
绵羊P糖蛋白/渗透性糖蛋白(P-GP)酶联免疫试剂盒
绵羊前列腺素F2α(PGF2α)酶联免疫试剂盒
绵羊保护素(CD59)酶联免疫试剂盒
绵羊心钠肽(ANP)酶联免疫试剂盒
绵羊碳酸酐酶IX (CA9)酶联免疫试剂盒
绵羊金属硫蛋白2 (MT2)酶联免疫试剂盒
绵羊肝配蛋白A1 (EFNA1)酶联免疫试剂盒
绵羊果糖二磷酸醛缩酶A(ALDOA)酶联免疫试剂盒
绵羊黑素瘤衍生亮氨酸拉链额外核因子(MLZE)酶联免疫试剂盒
绵羊腺苷酸环化酶3(ADCY3)酶联免疫试剂盒
绵羊无孢蛋白(ASPN)酶联免疫试剂盒
绵羊杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)酶联免疫试剂盒
绵羊趋化素样因子超家族成员4(CKLFSF4)酶联免疫试剂盒
绵羊视网膜母细胞瘤YZ蛋白(PRB)酶联免疫试剂盒
绵羊磷酸化核因子κBYZ蛋白α(pIκBα)酶联免疫试剂盒
绵羊趋化因子CC受体8(CCR8)酶联免疫试剂盒
绵羊解整合素金属蛋白酶8(ADAM8)酶联免疫试剂盒
绵羊CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)酶联免疫试剂盒
绵羊糖原合成酶激酶3α(GSK3α)酶联免疫试剂盒
绵羊蛋白激酶C-η(PKCη)酶联免疫试剂盒
绵羊间隙连接蛋白40(CX40)酶联免疫试剂盒
绵羊3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶1(HMGCS1)酶联免疫试剂盒
绵羊蛋白质二硫键异构酶(PDI)酶联免疫试剂盒
绵羊δ样蛋白1同源物(DLK-1)酶联免疫试剂盒
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绵羊神经调节蛋白1(NRG-1)酶联免疫试剂盒