联系电话:15527510518 18163548455 13296670271 13296673586QQ:1546342329 3176445674 试剂盒检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被样本抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成ZZ的黄色。颜色的深浅和样品中的样本呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1.酶标仪(450nm)
2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,ZZ结果乘以5才是样本实际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成 名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
微孔酶标板 | 12孔×8条 | 12孔×4条 | 无 |
标准品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 无 |
样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
底物A | 6mL | 3mL | 无 |
底物B | 6mL | 3mL | 无 |
终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
注:标准品浓度都不相同,麻烦联系客服索取相应说明书
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
2. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能
1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2. 灵敏度:ZD检测浓度小于(参考说明书)
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6个月
武汉纯度生物科技有限公司,主要销售常用抗原抗体、试剂、Elisa试剂盒、生化试剂盒、免疫检测试剂盒、金标试剂盒、金标检测卡、动物血清、血浆、全血、抗血清、毒素类标准品、生物试剂、培养基、实验室仪器耗材、化学试剂、生物制品、标准品、对照品、生化免疫制品、免疫亲和柱、菌株、质粒、室内质控品、细胞、培养基、PEG、病理染色液、免疫学试剂、蛋白组学试剂、细胞生物学试剂、分子生物学试剂、YZ剂、细胞因子等。武汉纯度生物时刻谨记产品质量,正如公司名一样,达到“专业规格,纯度保证”的质量生命线。公司秉承“客户为天,质量为根,诚信为本,创新为魂”的信念,将以优质的产品,完善的服务,为每一位客户的实验保驾护航。
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动物血浆:人血浆、新生牛血浆、大牛血浆、小牛血浆、绵羊血浆、山羊血浆、猪浆、驴血浆、马血浆、狗血浆、大鼠血浆、小鼠血浆、豚鼠血浆、兔血浆、空白小鼠血浆、空白大鼠血浆、SD大鼠血浆等等。
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常用诊断试剂用原料抗原-抗体(肿瘤标志物类、传染病类、心肌标志物类、优生及不孕不育类、生化免疫类原料、免疫球蛋白类、肝肾功能疾病类、激素、胰岛素类)蛋白质、多肽
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人抗甲型肝炎病毒IgM抗体(anti-HAV) ELISA Kit 48T/96T
人抗结核杆菌(TB-Ab)ELISA Kit 48T/96T
人富亮氨酸α2糖蛋白1(LRG1)ELISA Kit 48T/96T
人抗百日咳病毒(PT-Ab)ELISA Kit 48T/96T
人抗EB病毒抗体(EBV)ELISA Kit 48T/96T
人8异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)ELISA Kit 48T/96T
人基质金属蛋白酶YZ因子2(TIMP-2)ELISA Kit 48T/96T
人葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA Kit 48T/96T
人神经生长因子(NGF)ELISA Kit 48T/96T
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人嗜铬蛋白A(CgA)ELISA Kit 48T/96T
人载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA Kit 48T/96T
人抗凝血素抗体IgM(aPT1)ELISA Kit 48T/96T
人血小板衍化生长因子-BB(PDGF-BB) 48T/96T
人蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)ELISA Kit 48T/96T
人蛋白C(PC)ELISA Kit 48T/96T
人抗流行性出血热(EHFAb)ELISA Kit 48T/96T
人神经肽B(NKB)ELISA Kit 48T/96T
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人血清白蛋白(HSA)ELISA Kit 48T/96T
人磷酸果糖激酶(PFK)ELISA Kit 48T/96T
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人骨形成蛋白-2(BMP-2)ELISA Kit 48T/96T
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人骨骼肌受体酪氨酸激酶(MUSK)ELISA Kit 48T/96T
人磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA Kit 48T/96T
人糖胺聚糖 (GAG)ELISA Kit 48T/96T
人神经节苷脂(GM-1)ELISA Kit 48T/96T
人血小板衍生生长因子受体(PDGFR)ELISA Kit 48T/96T
人骨形成蛋白-4(BMP-4)ELISA Kit 48T/96T
人抗肝素PF4复合物抗体/HIT抗体(HIT)ELISA Kit 48T/96T
人沙眼衣原体(CT)ELISA Kit 48T/96T
人抗流行性腮腺炎病毒(EP-Ab)ELISA Kit 48T/96T
人雌三醇(E3)ELISA Kit 48T/96T
人血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA Kit 48T/96T
人血管内皮生长因子受体(VEGFR)ELISA Kit 48T/96T
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人血管内皮生长因子(VEGF)ELISA Kit 48T/96T
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人肺炎支原体抗体(MP-Ab)ELISA Ki 48T/96T
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人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA Kit 48T/96T
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人白细胞介素33(IL-33)ELISA Kit 48T/96T
人抗流行性脑膜炎病毒(PV-Ab)ELISA Kit 48T/96T
人抗丝集蛋白抗体(AFA)ELISA Kit 48T/96T
人精氨酸加压素(AVP)ELISA Kit ELISA Kit 48T/96T
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人胃蛋白酶原A(PGA)ELISA Kit 48T/96T
人胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)ELISA Kit 48T/96T
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人胰岛素样生长因子-2(IGF-2)ELISA Kit 48T/96T
人雄烯二酮(ASD)ELISA Kit 48T/96T
人白细胞介素32(IL-32)ELISA Kit 48T/96T
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人胎盘蛋白14 (PP14)ELISA Kit 48T/96T
人胃蛋白酶原C(PGC)ELISA Kit 48T/96T
人胃动素(MTL)ELISA Kit 48T/96T
人胃泌素(Gas)ELISA Kit 48T/96T
人集聚蛋白(Agrin)ELISA Kit 48T/96T
人肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA Kit 48T/96T
人可溶性P选择素(sP-selectin)ELISA Kit 48T/96T
人可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)ELISA Kit 48T/96T
人同型半胱氨酸(Hcy)ELISA Kit 48T/96T
人可溶性E选择素(sE-selectin)ELISA Kit 48T/96T
人总胆汁(TBA)ELISA Kit 48T/96T
人异柠檬酸脱氢酶(ICD)ELISA Kit 48T/96T
人抑癌基因Beclin1(BECN1)ELISA Kit 48T/96T
人抑癌基因SEMA3B ELISA Kit 48T/96T
人去甲肾上腺素(NA) ELISA KIT 48T/96T
人前列腺素E2(PGE2)ELISA Kit 48T/96T
人前列腺素E1(PGE1)ELISA Kit 48T/96T
人心房利钠肽(h-ANP)ELISA Kit 48T/96T
人乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)ELISA kit 48T/96T
人可溶性血管细胞粘附因子1(sVCAM-1)ELISA Kit 48T/96T
人可溶性粘附分子sCD26 ELISA Kit 48T/96T