N-Ethylmaleimide Sensitive Factor (NSF)ELISA试剂盒

产品名称：N-Ethylmaleimide Sensitive Factor (NSF)ELISA试剂盒用途该试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或其他相关生物液体中天然及部分N-Ethylmaleimide Sensitive Factor (NSF)ELISA试剂盒

需自备的设备及试剂
1、450±10nm 滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)
2、单道或多道微量加液器及吸头
3、稀释样品的EP 管
4、蒸馏水或去离子水
5、吸水纸
6、盛放洗液的容器

N-Ethylmaleimide Sensitive Factor (NSF)ELISA试剂盒储存及有效期：
1、未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶
液A、检测溶液B 以及96 孔板保存于-20oC。
2、使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于
-20oC，避免潮湿。
注意：
试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1 个月内使用完毕。
产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。

N-Ethylmaleimide Sensitive Factor (NSF)ELISA试剂盒标本的采集与保存:
1、血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2 小时或4oC 过夜，然后1000×g 离心20 分钟，取上清即
可，或将上清置于-20oC 或-80oC 保存，但应避免反复冻融。
2、血浆：用EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30 分钟内于2-8oC 1000×g 离心15 分钟，
取上清即可检测，或将上清置于-20oC 或-80oC 保存，但应避免反复冻融。
3、组织匀浆：
1） 取适量组织块，于预冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，称重后备用（组织块较大需先剪碎后
再匀浆）；
2） 可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果：首先将组织块移入玻璃匀浆器，加入5-10mL 预冷PBS 进行充
分研磨，该过程需在冰上进行（有条件实验室可选用机器匀浆）；得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融
进一步处理（超声破碎过程中注意冰浴降温；反复冻融法可重复2 次）。
3） 将制备好的匀浆液于5000×g 离心5 分钟，留取上清即可检测。
4、细胞裂解液：
1）贴壁细胞需要先用胰酶消化，离心收集细胞（悬浮细胞可直接离心收集）；
2）将收集到的细胞用冷PBS 洗3 次；
3）物理方法裂解细胞（可先超声破碎细胞，再反复冻融）：
i 超声破碎：取适量PBS 重悬细胞，用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂。
ii 反复冻融：将待破碎的细胞在-20oC 以下冰冻，室温融解，反复3 次，使细胞溶胀破碎。
4）将标本于2-8oC 1500×g 离心10 分钟，收集上清备用。
5、细胞培养上清或其它生物标本：请1000×g 离心20 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20oC 或-80oC 保
存，但应避免反复冻融。
注意：
1、以上标本均需密封保存，4oC 保存应小于1 周，-20oC 不应超过1 个月，-80oC 不应超过2 个月。
2、标本溶血会影响ZH检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
3、标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。N-Ethylmaleimide Sensitive Factor (NSF)ELISA试剂盒操作步骤:

	1.Add 100 μL of standard or sample to each well.
	2.Remove the liquid.
	3.Add 100 μL Biotinylated Detection Ab. Incubate 1 hour at 37℃.Aspirate and wash 3 times.
	4.Add 100 μL HRP Conjugate. Incubate 30 min at 37℃.Aspirate and wash 5 times.
	5.Add 90 μL of Substrate Reagent. Incubate for 15 min at 37℃.
	6.Add 50 μL of Stop Solution.
	7.Read the OD at 450 nm immediately. Calculation of the results.

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