人核因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)免疫组化试剂盒

产品名称：人核因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)免疫组化试剂盒
    该试剂盒以HRP标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，ZH加入HRP-SA，形成抗原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA复合物，显微镜下观察成像。
注意事项：
1. 修复后缓冲液须自然冷却，自来水冲洗后方能把切片取出，骤冷有可能导致结晶或抗原封闭。
2. 缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。
3. 若试剂为微量浓缩液，用前应低速离心，将内盖和管壁附着的溶液离到底部。
4. 封片前一定要换用TBS充分洗涤，以便洗去组织上残留的Tween 20，否则会影响结果观察。
5. 如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封片。
人核因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)免疫组化试剂盒，试剂盒所含试剂：
试剂A  通透液：0.1% Triton-X 100   10 mL（选用）
试剂B  封闭缓冲液（封闭用） 20 mL
试剂C （原装进口分装）已稀释的即用型一抗（2.5ml）
试剂D （原装进口分装）生物素化羊抗兔IgG 1支（浓度1.5 mg/mL，稀释比为1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液20ml
试剂E  HRP-SA复合物1支（浓度1 μM，稀释比1:50~1:200）100 μL
试剂F  DAB显色液 5ml
人核因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)免疫组化试剂盒在这里，我们更加建议各位老师和同学，可以考虑购买我们公司该产品的一抗和Sp免疫组化试剂盒一起做免疫组化实验，这样可以熟悉实验，增加实验成功率，优化实验成果步骤。
即用型SP(Streptavidin-Peroxidase)免疫组化检测试剂盒是利用LAB-SA第二代技术生产的免疫组化检测试剂，ZD特点是高灵敏度，低倍景染色，直接滴加，操作方便，孵育时间短，适用于冷冻切片、石蜡切片及固定的细胞涂片。可用于检测我公司的一抗。SP试剂盒内容：
无色试剂：内源性过氧化物酶阻断剂 
试 剂  A：封闭用正常山羊血清工作液
试 剂  B：生物素标记二抗工作液：生物素标记羊抗兔IgG 
试 剂  C：辣根酶标记链酶卵白素工作液

用户自备试剂：
1．10mM TBS（pH7.2~7.4），三羟基氨基甲烷1.21g，氯化钠7.6g
   加蒸馏水800mL，浓盐酸调pH值至7.2~7.4，ZH定容至1000mL
   TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积比）
2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液柠檬酸0.38g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水900mL，浓盐酸调pH值至6.0，ZH定容至1000mL或：0.5M EDTA修复液（pH8.0）EDTA·2H2O 186.1g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水        700mL，用10mM NaOH调pH值至8.0，ZH定容至1000Ml
3. 缓冲甘油封固剂10 mL
4. Tween 20 5 mL
人核因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)免疫组化试剂盒，石蜡包埋组织切片免疫染色
实验步骤（建议方案）：
石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度
1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr；
2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；
3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2 min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O洗2×2min；
4.抗原修复：根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O洗2×2min，TBS洗涤（2×2min）（具体修FF法见附1）
  注：有些抗原勿需修复，直接进入第5步封闭。
5.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育30 min；
6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜；
7.洗涤： TBS-T洗涤（3×5 min）；
8.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育10 min；
9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育30 min；
10.洗涤： TBS-T洗涤（3×5 min）；
11.封闭： 滴加试剂Tween 20，37℃湿盒孵育封闭20 min；
12.加HRP-SA： 滴加用抗体稀释液稀释的试剂E（1：50~200，终浓度5~20 nM），37℃湿盒中孵育30 min；
13.洗涤： TBS-T洗涤（3×5 min），TBS洗涤（2×5 min）；
14.显色：应用DAB溶液（试剂F）显色；
15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；
16.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；
17.观察成像： 显微镜下观察成像。
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