人丝裂原激活的蛋白激酶/MAP激酶检测试剂盒辣根过氧化物酶底物ABTS水溶性HRP底物,在过氧化物酶的作用下产生绿色终产物。该绿色产物在410nm及650nm具有两个主要的吸收峰。OPD和HRP反应时生成桔黄色的产物,在492nm时吸收Z大。OPD易溶于底物缓冲液,如Stable Peroxidase Substrate Buffer。
TMB被过氧化氢氧化时(由HRP催化)可形成蓝色产物,主要吸收峰在370 nm和652nm。加入硫酸或磷酸后,它会变成黄色,Z大吸收峰为450 nm。TMB灵敏度很高,达到相同的检测灵敏度需要的量比ABTS少,但这也可能产生较高的背景,所以要求使用较少的蛋白或较低的抗体浓度。
人丝裂原激活的蛋白激酶/MAP激酶检测试剂盒空白和对照的设置:
空白1:不加抗原,只加包被液。(检测一抗的非特异性吸附)
空白2:不加一抗,用稀释液代替。(检测二抗的非特异性吸附)
阴性对照:不加一抗,用免疫前血清代替。
结果判定:
标本/阴性对照比值:在得出标本(S)和阴性对照(N)的A值后,计算S/N值。(S=样品OD-空白OD,N=阴性对照OD-空白OD)
P/N > 2的判为阳性,人丝裂原激活的蛋白激酶/MAP激酶检测试剂盒颜色淡的阳性孔的稀释倍数即为抗体的效价。
空白对照一个是包被空白,只加包被液,不加抗原,这是检测一抗 的非特异性吸附的。空白2也很合理,不过阴性对照的血清,准备用多大稀释度的?人丝裂原激活的蛋白激酶/MAP激酶检测试剂盒这个要做几个稀释度,那个浓度的非特异性媳吸附Z小,就固定用那个浓度。
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