做人复制蛋白A检测试剂盒时。空白值总是比较高,在0.3-0.4之间。如何降低空白OD值.(已经摸过二抗稀释度了),我是用pbs+0.1%tween-20洗8次,然后pbs洗3次,还是不行.
1,不知道你具体是怎样操作的。你可以试一下,在加完A、B液后,将板子盖住,有可能是B液见光分解了一部分,使读数偏高了。
2,我认为是非特异性吸附造成的,可以加表面活性剂在洗液中,或加入干酪素在反应液中,效果很好。
3,影响因素多着呢。人复制蛋白A检测试剂盒有可能是你包被物质或封闭液跟二抗有非特异性反应。把你的试验说详细点儿,比如包被什么?怎么封闭?
不知道你所做的ELISA是不是间接法的?你所说说的空白是什么空白?
我这里经常做的几种空白,仅供参考。
阴性对照孔:所检测项目为阴性的标准样品,实验后检测数值即为阴性对照数值.一般属于全面考察本底的对照。
人复制蛋白A检测试剂盒酶空白孔:不加样品,仅在加酶结合物步骤加入规定量酶,以后步骤同其它样品操作.实验后检测数值即为酶空白数值.一般考察的是板和酶工作浓度是否合适,洗涤液是否可用或者板包被物和二抗是否有交叉反应。
底物空白孔:无加样品和加酶步骤,仅在加底物显色操作时在该孔内加入规定量显色剂,读数后即为底物空白数值,就是考察A和B的稳定性。
纯空白:孔内仅加终止液.一般是反应板读数调零用的
人复制蛋白A检测试剂盒首先应该找到本底产生原因.把这几个空白一起做一下.出来什么结果再讨论.
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