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KURAMOCHI细胞株价格,传代细胞 之角膜缘干细胞(原代培养):
吸弃培养液
少量pbs将细胞洗一遍
弃之
0.1%姨酶:0.02%EDTA(1:1)混合液1ml将细胞表面过一遍,弃之
0.1%姨酶:0.02%EDTA(1:1)混合液1ml加入培养瓶,置培养箱3~5分钟,看胞体变圆,用弯头吸管吹打瓶壁黏附的细胞
加DMEM+20%FBS混合液1ml终止消化
800转/分 离心 5分钟
弃上清
离心管中加入1mlPBS,将细胞吹打起来
800转/分 离心 5分钟
弃上清
加入DMEM+20%FBS混合液1ml将细胞吹打起来
细胞悬液装入培养瓶
置培养箱20分钟
倒置显微镜下可见部分干扰的成纤维细胞贴壁
吸出细胞悬液1:2分装新的培养瓶
注:加带血清的培养基终止消化后再吹打容易起泡沫,影响操作,因此选择边消化边吹打。消化完毕后,本人用胎盘兰染色证实90%细胞存活,说明此操作合适。
有的客户收到SERANA南美源胎牛血清问为什么血清那么红,南美血清本身是很红很红,血一样红,我见过很多公司的南美血清是很红,南美除了阿根廷之外,都是很红的,并且血红素也并不影响血清的质量。但是市面上有很多种仿货并不红,这就有问题了。如果一个客户现在还说,南美血清为何这么红的话,那老师有可能没买过正宗的南美血清国产血清是蜡黄色。北美血清的颜色就没有这么红,颜色很淡,淡黄至微红。澳洲血清的血清介于南美和北美之间。更多血清小知识可以联系我们公司张老师:!
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ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多,而且其操作中有一定的技术要求,在检测过程中除正常反应外,有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因主要有:①标本因素;②试剂因素;③操作因素。下面就一些常见ELISA操作过程中的问题一一分析。
1.样品稀释
酶联免疫反应是一种敏感性很高的反应,如果血清不稀释,不可避免会产生很强的非特异性反应,出现假阳性。因此,国外检测血清抗体的试剂盒,均规定将血清稀释至适当的倍数,以降低非特异性反应,使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。一般产品的样品稀释倍数均通过大量试验确定,以保证试验的灵敏度和特异性。但是,有些用户未能严格按使用说明书操作,如某些产品应取10μl样品进行稀释,个别用户取5μl甚至1μl样品进行稀释,由于吸嘴上不可避免地沾有样品以及微量移液器的精度不够,因此造成样品稀释倍数不准确,检测结果出现问题。
2.试剂盒平衡
试剂盒中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温(约25℃),一般需在室温放置20~30分钟以上。平衡时间太短会造成试剂混匀不够,样品孵育时间相对缩短,ELISA反应不够充分。冬季室温低,可将试剂盒置37℃温箱20分钟。
3.样品和试剂的混匀
稀释前、后的样品必须充分混匀,所有试剂在加样前也须摇匀,以保证试验的均一性。
4.加样
在现在的ELISA商品试剂盒中,必然有使用微量加样器加入样本的步骤。注意的关键点是:加样不可太快,要避免加在孔壁上部,不可溅出和产生气泡。加样太快,无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区,易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。所以,有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性,下次测定为阴性,往往就是上述加样及试剂的错误所致。
5.温育
温育是ELISA测定中影响测定成败为关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。一些操作者,擅自改变说明书操作,使用自己喜欢的温育时间和温育温度,这样造成一些不必要的麻烦。因为,不同试剂盒有不同的温育时间和温育温度的选择,随意更改温育时间或者温育温度将导致试验结果出现偏差。
6.洗板
固相免疫测定技术是一种非均相免疫测定技术,需以洗涤操作将特异结合于固相的抗原或抗体与反应温育过程中吸附的非特异成份分离开来,以保证ELISA测定的特异性。洗板对于ELISA测定来说,也是极其关键的一步。洗液尽量不要溢出孔外;加洗液后要静置1分钟,甩去板孔中洗液后,一定要大力拍干;及时更换吸水纸,尤其是拍过酶标记物的吸水纸一定要弃去,否则可能影响试验结果。
7.边缘效应
使用96孔板的ELISA测定中,常发现有“边缘效应”,即外周孔显色较ZX孔深。经研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体,在实验室的常规ELISA测定中,将板从室温(通常在25℃左右)置于37℃温箱,板也升温时,在外周孔与ZX孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时,将板和溶液均加热至温育温度(如37℃),就可以很容易地排除“边缘效应”,并且可提高测定的重复性。
8.显色
显色一定要控制时间,根据试剂盒说明操作即可。一般来说,显色时间过短,结果偏低;显色时间过长,空白ZG或者非特异性显色增加。
9.比色
比色要注意波长的选择。以TMB为底物和以OPD为底物的试剂盒均有使用,而前者比色波长为450nm,后者为492nm,滤光片需根据要求随时更换。因此,容易出现滤光片错用的问题。
其次,单波长或双波长比色选择的问题。所谓的单波长比色即是通常的以对显色具有Z大吸收的波长如450nm或492nm进行比色测定;而双波长双色则酶标仪在敏感波长如450nm和非敏感波长如630nm下各测定一次,敏感波上下的吸光度测定值为样本测定酶反应特异显色的吸光度与板孔上指纹、刮痕、灰尘等脏物所致的吸光度之和;非敏感波长下测定即改变波长至一定值,使得样本测定酶反应特异显色的吸光度值为零,此时测得的吸光度即为脏物的吸光度值。后酶标仪给出的数值为敏感波长下的吸光度值与非常感波长下的吸光度值的差。因此,双波长比色测定具有能排除由微滴板本身、板孔内标本的非特异吸收、指纹、刮痕、灰尘等对特异显色测定吸光度的影响的优点。由于ELISA测定中单个空白孔的非特异吸收上有一定程度的不确定性,也就是说每次测定或同次测定空白孔位置的不同均有可能得到不同吸光度测定值,故而在ELISA测定比色时,是使用双波长比色。
suer Calu-6 人退行性癌细胞
suer CaOV3 人卵巢癌细胞
suer Capan1 人胰腺癌细胞
suer Capan2 人胰腺癌细胞
suer CaSki 人宫颈肠转移癌细胞
suer CBRH-7919 大鼠肝癌细胞
suer CCD-1095Sk 人乳腺浸润性导管癌旁皮肤细胞
suer CCRF-CEM 人急性淋巴细胞白血病T淋巴细胞
suer CEM/C1 人急性淋巴细胞白血病细胞
suer CFPAC-1 人胰腺癌细胞
suer Chang liver 人张氏肝细胞
suer CHL 仓鼠肺细胞
suer CHO ZG仓鼠卵巢细胞
suer CHO/dhFr 仓鼠卵巢细胞,二氢叶酸还原酶缺陷
suer CHO-K1 仓鼠卵巢细胞亚株
suer CL1 人前列腺癌
suer CCRF-CEM 人鼻咽癌细胞
suer CNE-2 人鼻咽癌细胞
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suer COLO 320DM 人结直肠腺癌细胞
suer COLO-704 人卵巢癌细胞
suer COLO720E 人卵巢癌细胞
suer COS-1 非洲绿猴SV40转化的肾细胞
suer COS-7 非洲绿猴SV40转化的肾细胞
suer COV362 人卵巢癌细胞
suer COV434 人卵巢癌细胞
suer COV504 人卵巢癌细胞
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suer CRL-9444 人膜间皮细胞
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suer CT26.WT 小鼠结肠癌细胞
suer CTLA4 Ig-24 ZG仓鼠卵巢细胞
suer CTLL-2 细胞毒性T淋巴细胞
suer CV-1 非洲绿猴肾细胞
suer CW-2 人结肠腺癌细胞
suer D407 人视网膜色素上皮细胞
suer D6 人肺腺癌
suer Dami 人巨核细胞白血病细胞
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suer DC2.4 小鼠树突状细胞
suer DH82 狗肾恶性组织细胞增生症细胞
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suer DU145 人前列腺癌
suer EA.hy926 人脐静脉细胞融合细胞
suer EBTr (NBL-4) 牛胚气管细胞
suer EC18 人食管癌细胞
suer EC-9706 人食管癌细胞
suer ECA 小鼠艾氏腹水瘤细胞
suer ECA-109 人食管癌细胞
suer ECV304 人脐静脉内皮细胞
suer ED-25 人肝静脉内皮细胞
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suer EOMA 小鼠血管瘤内皮细胞
suer ES-2 人卵巢透明细胞癌
suer F81 猫肾细胞
suer F9 小鼠畸胎瘤细胞
suer FaDu 人咽鳞癌细胞
suer FO 小鼠骨髓瘤细胞
suer FRhK-4 恒河猴胚肾细胞
suer GBC-SD 人胆囊癌细胞
suer GES-1 人胃黏膜上皮细胞
suer GLC82 人低分化肺腺癌细胞
suer GRC-1 人肾癌细胞
suer H128 人小细胞肺癌
suer H1299 人非小细胞肺癌
suer H22 小鼠肝癌细胞
suer H292 人肺癌细胞(淋巴结转移)
suer H460 人大细胞肺癌细胞
suer H466 人小细胞肺癌
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suer H9c2(2-1) 大鼠心肌细胞
suer Hacat 人正常皮肤细胞
suer HBL-100 人整合SV40基因的乳腺上皮细胞
suer HBZY-1 大鼠肾小球系膜细胞
suer HCC94 人子宫鳞癌细胞(高分化)
suer HCC1937 人乳腺癌细胞
suer HCC827 人非小细胞肺癌细胞
suer HCCC-9810 人胆管细胞型肝癌细胞
suer HCCLM3 人高转移肝癌细胞
suer HCCLMS 人肝转移癌
suer Hce-8693 人盲肠腺癌细胞(未分化)
suer HCE-8962 人盲肠未分化癌
suer HCT 116 人结肠癌细胞
suer HCT-15 人结直肠腺癌细胞
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suer HEB 人脑胶质细胞株
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suer HEK293-L 人胚肾细胞
suer HEK293-T 人胚肾细胞
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suer hep 3B 人肝癌细胞
suer Hep 3B2.1-7 人肝癌细胞
suer Hep-2 喉表皮样癌
suer Hep3B 人肝癌
suer Hepa 1-6 小鼠肝癌细胞
suer Hep G2 人肝癌细胞
suer HepG2.2.15 人肝癌细胞
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suer HGC-27 人胃癌细胞(未分化)
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suer HK-2 人肾小管上皮细胞
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suer HO-8910 人卵巢癌
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suer Hut102 人皮肤T细胞淋巴瘤
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suer HUVEC-C 人脐静脉血管内皮细胞株
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suer J558L 鼠骨髓瘤
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suer Jurkat 人急性T细胞白血病
suer Jurkat, Clone E6-1 人T淋巴细胞白血病细胞
suer K562 人慢性髓原白血病细胞
suer K7M2-WT 小鼠骨肉瘤成骨细胞
suer KB 人口腔表皮样癌细胞
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suer KM202L 人卵巢癌细胞
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suer KP2 人胰腺癌细胞
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suer KP-N-NS 人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移)
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suer KURAMOCHI 人卵巢癌细胞
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suer Kyse450 人食管癌细胞
suer KYSE-510 人食管癌细胞
suer L Wnt-3A 小鼠皮下结缔组织细胞
suer L-02 人正常肝细胞
suer L1210 小鼠白血病细胞
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suer L6565 小鼠白血病克隆细胞系
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suer L929 小鼠成纤维细胞
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suer Lec1 仓鼠卵巢细胞
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suer LLC 小鼠肺癌细胞
suer LLC-MK2 恒河猴肾细胞
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suer LO2 人正常肝细胞
suer LoVo 人结肠癌细胞
suer LS-174-T 人结肠腺癌细胞
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suer LX-2 人肝星形细胞
suer MA-104 恒河猴肾细胞
suer MC3T3-E1 小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14
suer MC3T3-E1 Subclone 14 小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14
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suer MCF7 人乳腺癌细胞
suer MDA-MB-231 人乳腺腺癌
suer MDA-MB-415 人乳腺腺癌细胞
suer MDA-MB-435 人乳腺癌高转移细胞
suer MDA-MB-435S 人乳腺导管癌
suer MDA-MB-436 人乳腺腺癌细胞
suer MDA-MB-453 人乳腺癌细胞
suer MDA-MB-468 人乳腺癌细胞
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suer MDCK 狗肾细胞
suer MDCK(NBL-2) 狗肾细胞
suer ME12 人前列腺癌
suer ME-180 人子宫颈表皮癌细胞
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suer MGC80-3 人胃癌细胞
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suer PA317 小鼠胚胎成纤维细胞
suer PANC-1 人胰腺癌细胞
suer PC 61 5.3 [PC 61; PC 61.5.3] 杂交瘤细胞CD25
suer PC-12 大鼠嗜铬细胞瘤
suer PC-12(低分化) 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(低分化)
suer PC-12(高分化) 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化)
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suer RSC96 大鼠雪旺细胞
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suer SK-OV-3 人卵巢癌细胞
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suer SP2/0 小鼠骨髓瘤细胞
suer SPC-A-1 人肺腺癌细胞
suer SUNE1 人鼻咽癌细胞
suer SUP-B15 人Ph+急淋白血病细胞系
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suer SV-HUC-1 人输尿管上皮永生化细胞
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suer WPMY-1 人正常前列腺基质永生化细胞
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