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RT4细胞,膀胱移行细胞乳头瘤细胞(RT4价优)细胞凋亡从线虫到人类都高度保守,当细胞接收到凋亡信号后,通过一系列精细调控和传递后,下游的凋亡执行者caspase家族蛋白(CED-3是其中一员)被激活从而诱导凋亡的发生。施一公教授领导的实验室十五年来一直致力于对细胞凋亡调控机理的研究。但是这条通路上caspase蛋白被激活的具体机制至今仍不清晰。2010年施一公实验室解析了CED-4细胞凋亡小体八聚体的晶体结构,是对CED-4介导的CED-3激活机制研究的重要突破,但是CED-3与CED-4的相互作用界面及机制仍然有待揭示。
RT4细胞,膀胱移行细胞乳头瘤细胞(RT4价优),血清是细胞培养液中重要的成分之一,含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。常见问题解答:
1、有必要做热灭活吗?
实验显示,经过正确处理的热灭HX清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点",常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。
若非必须,可以不需要做热处理这一步。不但节省时间,更确保血清的质量!
2、细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?
一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察培养基是否混浊,然后,在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。
如果在镜下观察细胞,生长状态良好,与黑点出现前相比,没有任何变化,那么,黑点的出现可能与以下几种情况有关:
(1)细胞生长过老,破碎的细胞残骸;
(2)血清质量不好,反复冻融的结果;
(3)配制培养基的pH值偏高,不宜细胞生长;
(4)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;
(5)培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除。
3、 细胞培养中如何防止黑点生成?
(1) 尽可能地减少血清冻融次数。
(2) 培养基无需37℃水浴。
(3) 培养基保持PH值7.0- 7.2。
(4) 严格控制配制培养基的水质,容器定期刷洗。
(5) 掌握细胞传代的时机,细胞切勿生长过老。
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本人做销售6年多了,已经卖了将近3万多瓶的血清了,囊括:Gibco胎牛血清、Hyclone胎牛血清、德国SERANA胎牛血清、活性炭处理血清、超低IgG血清、透析胎牛血清、热灭HX清等,有很多老师收到血清使用时发现有沉淀想象,像头皮屑有的甚者在纤维镜下看到像成团棉花一样,因此怀疑产品的质量问题,其实这是没有根据的。它是由纤维蛋白的凝聚产生,对血清质量没有任何影响,沉淀的产生原因很多,和厂家的加工生产方式密切相关。国产的血清,大多来自北方,由于价格低廉,保存环境都不好,从采血、冷冻、运输到生产会经过多次冻融,每次冻融过程,就会析出部分纤维蛋白沉淀,这样,血清成品过滤后看起来反而更加的“干净”,很少有沉淀产生。而进口的胎牛血清,过滤分装前很少会反复冻融,生产后的成品也是清澈的,但随着时间的推移,血清中的大量纤维蛋白会析出形成沉淀。当然,进口的新生牛血清,一般牛龄都在2周左右,血清中的各种蛋白含量明显偏高,生产后血清可能会浑浊,甚至有大量沉淀。当然,购买回来的血清都是冰冻状态,使用时需要融化,融化过程在温度较低的状态下慢慢进行,否则沉淀相对较多,虽然沉淀并不直接影响血清的质量,但对细胞的显微观察有一定的阻碍。那如何去除这些絮状沉淀呢,我司王技术总结归纳了血清沉淀融化“三步曲”,希望能帮到您。
一步:室温90min或者15-20°C水浴18min。
第二步:20°C水浴25min。
第三步:37°C水浴35min。
如果内有头皮屑絮状沉淀,说明脂蛋白和纤连蛋白析出,不会影响细胞培养状态。
假设细胞培养每代传代时间超过正常传代时间,有可能细胞培养过程中受到了污染或致电技术咨询。
关键词:胎牛血清;进口胎牛血清;沉淀;析出;细胞污染;絮状