人乳腺癌细胞(耐阿霉素),MCF-7/ADR细胞

人乳腺癌细胞(耐阿霉素),MCF-7/ADR细胞
种属来源:    人
组织来源:    肺
疾病特征:    肺癌
细胞形态:    上皮细胞样
生长特性:    贴壁生长
培养基:    DMEM培养基，90%；FBS，10%。
生长条件:    气相：空气，95%；二氧化碳，5%; 温度：37 ℃, 
传代方法:    1：2至1：6，每周2次。
冻存条件:    90% 完全培养基+10% DMSO，液氮储存
支原体检测:    阴性

人乳腺癌细胞(耐阿霉素),MCF-7/ADR细胞复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
   1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
   2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
    3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
  将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
    1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
    2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
    3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
人乳腺癌细胞(耐阿霉素),MCF-7/ADR细胞贴壁细胞: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBS洗1－3次）。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，(根据经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml完全培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入完全培养基后继续培养或实验。
人乳腺癌细胞(耐阿霉素),MCF-7/ADR细胞培悬浮细胞: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入完全培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入完全培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。需要指出的是，在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群除非细胞经过了遗传改造。
人乳腺癌细胞(耐阿霉素),MCF-7/ADR细胞培养基的配制

培养基	品Pai	货号
D-MEM/F-12	GIBCO	12400024
Dulbecco's Modified Eagle Medium (D-MEM), powder (high glucose)	GIBCO	12800017
F-12 Nutrient Mixture (Ham) powder	GIBCO	21700075
Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM) powder	GIBCO	12200036
Leibovitz's L-15 Medium powder	GIBCO	41300039
McCOY's 5A	SIGMA	M4892
Minimum Essential Medium (MEM) Alpha Medium powder (MEMα) with ribonucleosides and deoxyribonucleosides	GIBCO	11900024
Minimum Essential Medium (MEM) Alpha Medium powder (MEMα) without ribonucleosides and deoxyribonucleosides	GIBCO	12000022
Minimum Essential Medium (MEM) powder	GIBCO	41500034
NUTRIENT MIXTURE F12 HAM KAIGHN'S MODIFICATION (F12K)	SIGMA	N3520
RPMI Medium 1640	GIBCO	31800022
EGF	SIGMA	E9644
Sodium pyruvate	SIGMA	P2256-25G
MEDIUM 199, WITH EARLE'S SALTS AND L-GLUTAMINE, WITHOUT SODIUM BICARBONATE. CELL CULTURE TESTED	SIGMA	M5017

2、 按要求添加碳酸氢钠、谷氨酸钠、HEPES等，充分搅拌使之溶解。
3、 调pH至7.2左右。
4、 加水至ZZ体积。
5、 在超净台中对溶液进行滤过CJ，分装入250 mL或500 mL玻璃瓶中，用翻帽塞塞紧瓶口。
6、 瓶口封好，4℃冰箱贮存。