大鼠正常肝细胞,BRL 3A细胞 大鼠正常肝细胞,BRL 3A细胞

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大鼠正常肝细胞,BRL 3A细胞  

大规模培养常用方法

根据动物细胞的类型，可采用贴壁培养、悬浮培养和固定化培养等三种培养方法进行大规模培养。

一、动物细胞生长特性及培养温度

1、细胞生长缓慢，易污染，培养需用抗生素

2、细胞大，无细胞壁，机械强度低，环境适应性差

3、需氧少，不耐受QL通风与搅拌

4、群体生长效应，贴壁生长（锚地依赖性）

5、培养过程产品分布细胞内外，成本高

6、原代培养细胞一般繁殖50代即退化死亡

依据在体外培养时对生长基质依赖性差异，动物细胞可分为两类：

贴壁依赖型细胞：需要附着于带适量电荷的固体或半固体表面才能生长，大多数动物细胞，包括非淋巴组织细胞和许多异倍体细胞均属于这一类。

非贴壁依赖型细胞：无需附着于固相表面即可生长，包括血液、淋巴组织细胞、许多肿瘤细胞及某些转化细胞。

培养细胞的适温度相当于各种细胞或组织取材机体的正常温度。人和哺乳动物细胞培养的适温度为35~37℃。偏离这一温度，细胞正常的代谢和生长将会受到影响，甚至死亡。总的来说，培养细胞对低温的耐力比高温高。温度不超过39℃时，细胞代谢强度与温度成正比；细胞培养置于39~40℃环境中1h，即受到一定损伤，但仍能恢复；当温度达43℃以上时，许多细胞将死亡。当温度下降到30~20℃时，细胞代谢降低，因而与培养基之间物质交换减少。首先看到的是细胞形态学的改变以及细胞从基质上脱落下来。当培养物恢复到初始的培养温度时，它们原有的形态和代谢也随之恢复到原有水平。

SUER0597(XR)    T2细胞，人转HLA-2基因B细胞

SUER0598(XR)    HPT-8细胞，人滋养层上皮细胞

SUER0599(XR)    WPMY-1细胞，人正常前列腺基质永生化细胞

SUER0600(XR)    RWPE-1细胞，人正常前列腺上皮细胞

SUER0601(XR)    MCF 10A细胞，人正常乳腺上皮细胞

SUER0602(XR)    ?PT67细胞，鼠逆转录酶病毒包装细胞

SUER0603(XR)    LLC细胞，小鼠Lewis肺癌细胞

SUER0604(XR)    MEL细胞，小鼠红白血病细胞

SUER0605(XR)    ?Neuro-2a细胞，小鼠脑神经瘤细胞

SUER0606(XR)    B95-8细胞，EB病毒转化的绒猴淋巴细胞

SUER0607(XR)    U14-GFP细胞，GFP标记的小鼠子宫颈癌细胞

SUER0608(XR)    FAT细胞，大鼠鼻咽癌细胞

SUER0609(XR)    GH3细胞，大鼠垂体瘤细胞

SUER0610(XR)    MMQ细胞，大鼠垂体瘤细胞

SUER0611(XR)    NR8383细胞，大鼠肺泡巨噬细胞

SUER0612(XR)    LLC-WRC 256细胞，大鼠腹水癌细胞

SUER0613(XR)    Walker256细胞，大鼠腹水癌细胞

SUER0614(XR)    CBRH-7919?细胞，大鼠肝癌细胞

SUER0615(XR)    CRL-1600细胞，大鼠肝癌细胞

SUER0616(XR)    R15细胞，大鼠肝癌细胞

SUER0617(XR)    RH-35细胞，大鼠肝癌细胞

SUER0618(XR)    H4-II-E-C3细胞，大鼠肝癌细胞

SUER0619(XR)    H-4-II-E细胞，大鼠肝癌细胞

SUER0620(XR)    UMR-106细胞，大鼠骨肉瘤细胞

SUER0621(XR)    IR983F细胞，大鼠骨髓瘤细胞

SUER0622(XR)    Y3-Ag 1.2.3细胞，大鼠骨髓瘤细胞

SUER0623(XR)    C6细胞，大鼠脑胶质瘤细胞

SUER0624(XR)    F98细胞，大鼠脑胶质瘤细胞

SUER0625(XR)    MADB106细胞，大鼠乳腺癌细胞

SUER0626(XR)    SHZ-88细胞，大鼠乳腺癌细胞

SUER0627(XR)    PC-12细胞，大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞

SUER0628(XR)    PC-12(低分化)细胞，大鼠肾上腺嗜铬瘤(低分化)细胞

SUER0629(XR)    PC-12(高分化)细胞，大鼠肾上腺嗜铬瘤(高分化)细胞

SUER0630(XR)    RBL-2H3细胞，大鼠嗜碱性白血病

SUER0631(XR)    RBL-1细胞，大鼠嗜碱性粒性白血病

SUER0632(XR)    RIN-m5f细胞，大鼠胰岛β瘤细胞

SUER0633(XR)    INS-1细胞，大鼠胰岛瘤细胞

SUER0634(XR)    TMNE细胞，化学转化小鼠鼻咽上皮细胞

SUER0635(XR)    DT40细胞，鸡淋巴瘤细胞

SUER0636(XR)    DH82细胞，犬巨噬(狗肾恶性组织增生症)细胞

SUER0637(XR)    P815*细胞，鼠肥大瘤细胞

SUER0638(XR)    MCA-RH7777细胞，鼠肝癌细胞

SUER0639(XR)    J558L细胞，鼠骨髓瘤细胞

SUER0640(XR)    CMT93细胞，鼠结肠癌细胞

SUER0641(XR)    WEHI 164细胞，鼠纤维肉瘤细胞

SUER0642(XR)    ?SH-2，3,4?细胞，鼠杂交瘤细胞

SUER0643(XR)    W6/32细胞，小鼠B杂交瘤细胞

SUER0644(XR)    LM9细胞，小鼠HGPRT基因缺陷型骨肉瘤细胞

SUER0645(XR)    LLC1[LL/2]细胞，小鼠Lewis肺癌细胞

SUER0646(XR)    LLC-RFP-puro细胞，小鼠Lewis肺癌细胞

SUER0647(XR)    E.G7-OVA细胞，小鼠T淋巴瘤细胞

SUER0648(XR)    PK136细胞，小鼠X小鼠细胞

SUER0649(XR)    EAC 细胞，小鼠艾氏腹水癌细胞

SUER0650(XR)    L1210细胞，小鼠白血病细胞

SUER0651(XR)    M1细胞，小鼠白血病细胞

SUER0652(XR)    P388细胞，小鼠白血病细胞

SUER0653(XR)    L6565细胞，小鼠白血病克隆系细胞

SUER0654(XR)    AtT-20细胞，小鼠垂体瘤细胞

SUER0655(XR)    Raw-Blue细胞，小鼠单核白血病细胞

SUER0656(XR)    J774A.1细胞，小鼠单核巨噬细胞

SUER0657(XR)    RAW 264.7细胞，小鼠单核巨噬白血病细胞

SUER0658(XR)    P815细胞，小鼠肥大瘤细胞

SUER0659(XR)    LA795细胞，小鼠肺腺癌细胞

SUER0660(XR)    S-180细胞，小鼠腹水瘤/小鼠肉瘤细胞

SUER0661(XR)    H22细胞，小鼠肝癌细胞

SUER0662(XR)    Hepa 1-6细胞，小鼠肝癌细胞

SUER0663(XR)    MH134细胞，小鼠肝癌细胞

SUER0664(XR)    MLTC-1细胞，小鼠睾丸间质瘤细胞

SUER0665(XR)    CRL-2836细胞，小鼠骨肉瘤成骨细胞

SUER0666(XR)    K7M2 wt细胞，小鼠骨肉瘤成骨细胞

SUER0667(XR)    FO细胞，小鼠骨髓瘤细胞

SUER0668(XR)    P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]细胞，小鼠骨髓瘤细胞

SUER0669(XR)    P3X63Ag8细胞，小鼠骨髓瘤细胞

SUER0670(XR)    P3X63Ag8.653细胞，小鼠骨髓瘤细胞

SUER0671(XR)    SP2/0细胞，小鼠骨髓瘤细胞

SUER0672(XR)    Sp2/0-Ag14细胞，小鼠骨髓瘤细胞

SUER0673(XR)    B16细胞，小鼠黑色素瘤细胞

SUER0674(XR)    B16/??CRL-6323细胞，小鼠黑色素瘤细胞

SUER0675(XR)    B16-F0细胞，小鼠黑色素瘤细胞

SUER0676(XR)    B16-F1细胞，小鼠黑色素瘤细胞

SUER0677(XR)    Yac-1细胞，小鼠红白血病细胞

SUER0678(XR)    F9细胞，小鼠畸胎瘤细胞

SUER0679(XR)    P19细胞，小鼠畸胎瘤细胞

SUER0680(XR)    F9细胞，小鼠畸胎瘤/小鼠胚胎癌细胞

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二、贴壁培养（attachment culture）是指细胞贴附在一定的固相表面进行的培养。

1、生长特性：贴壁依赖型细胞在培养时要贴附于培养（瓶）器皿壁上，细胞一经贴壁就迅速铺展，然后开始有丝分裂，并很快进入对数生长期。一般数天后就铺满培养表面，并形成致密的细胞单层。

2、贴壁培养的优点：

容易更换培养液；细胞紧密黏附于固相表面，可直接倾去旧培养液，清洗后直接加入新培养液。

容易采用灌注培养，从而达到提高细胞密度的目的；因细胞固定表面，不需过滤系统。

当细胞贴壁于生长基质时，很多细胞将更有效的表达一种产品。

同一设备可采用不同的培养液/细胞的比例。

适用于所有类型细胞。

3、贴壁培养的缺点：与悬浮培养法相比

扩大培养比较困难，投资大；

占地面积大；

不能有效监测细胞的生长；

4、细胞贴壁的表面：要求具有净阳电荷和高度表面活性。对微载体而言还要求具一定电荷密度；若为有机物表面，必须具有亲水性，并带阳电荷。

5、贴壁培养系统：主要有转瓶、中空纤维（后面ZT介绍）、玻璃珠、微载体系统（后面介绍）等。

转瓶培养系统：培养贴壁依赖型细胞初采用转瓶系统培养。转瓶培养一般用于小量培养到大规模培养的过渡阶段，或作为生物反应器接种细胞准备的一条途径。细胞接种在旋转的圆筒形培养器-转瓶中，培养过程中转瓶不断旋转，使细胞交替接触培养液和空气，从而提供较好的传质和传热条件。

转瓶培养具有结构简单，投资少，技术成熟，重复性好，放大只需简单的增加转瓶数量等优点。 但也有其缺点：劳动强度大，占地空间大，单位体积提供细胞生长的表面积小，细胞生长密度低，培养时监测和控制环境条件受到限制等。 现在使用的转瓶培养系统包括二氧化碳培养箱和转瓶机两类。

反应器贴壁培养 此种培养方式中，细胞贴附于固定的表面生长，不因为搅拌而跟随培养液一起流动，因此比较容易更换培养液，不需要特殊的分离细胞和培养液的设备，可以采用灌流培养获得高细胞密度，能有效地获得一种产品；但扩大规模较难，不能直接监控细胞的生长情况，故多用于制备用量较小、价值高的生物药品。

CelliGen、CelliGen PlusTM和Bioflo3000反应器是常用的贴壁培养式生物反应器，用于细胞贴壁培养时可用篮式搅拌系统和圆盘状载体。此载体是直径6毫米无纺聚酯纤维圆片，具很高表面积与体积比（1200cm2/g），利于获得高细胞密度。篮式搅拌系统和载体培养是目前贴壁细胞培养使用多方式，用于杂交瘤细胞、Hela细胞、293细胞、CHO细胞及其它细胞培养。此种方式培养细胞，细胞接种后贴壁快。

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