【产品名称】商品名称:甲型流感病毒N1亚型(IAV-N1)核酸检测试剂盒(RT-PCR荧光探针法)
Name :Diagnostic Kit for Influenza A virus subtype N1 RNA(RT-PCR Fluorescence Probing)
【包装规格】48T/盒
【预期用途】本试剂盒适用于检测的咽拭子、血清和痰等标本中甲型流感病毒N1亚型RNA,适用于甲型流感病毒N1亚型感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。
【检验原理】本试剂盒用一对甲型流感病毒N1亚型特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用一步法荧光RT-PCR技术对甲型流感病毒N1亚型RNA进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
【试剂组成】 名 称 | 规 格 |
酶液 | 50μL×1管 |
IAV-N1反应液 | 1.0mL×1管 |
IAV-N1阳性质控品 | 50μL ×1管 |
阴性质控品 | 250μL ×1管 |
说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。
【储存条件及有效期】-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融少于7次,有效期12个月。
【适用仪器】ABI 、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。
【标本采集】咽拭子:应使用专用采样拭子,适度拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位,应避免触及舌部;迅速将拭子放入标本采集管中,旋紧管盖并密封,以防干燥。
全血:疑似感染病人的静脉血2mL至EDTA-2Na抗凝管,8000rpm离心2min,取适量上清液于1.5mL灭菌离心管中。
痰: 以清晨的DY口痰为宜。先用清水漱口,嘱患者用力咳出深部的痰于无菌样本保存管,密封,即可送检。
【保存和运输】上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过6个月,标本运送应采用2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。
【使用方法】 - 样品处理(样本处理区)
1.样本前处理 取适量样本于1.5mL灭菌离心管中,按RNA提取试剂盒说明书进行提取。
2.RNA提取 推荐采用广州维伯鑫生物科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(离心柱提取法),请按照试剂盒说明书进行操作。
- 试剂配制(试剂准备区)
根据待检测样本总数,设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照;样品每满7份,多配制1份),每测试反应体系配制如下表:
试剂 | IAV-N1反应液 | 酶液 |
用量 | 20μL | 1μL |
- 加样(样本处理区)
将步骤1提取的RNA、阳性质控品、阴性质控品各取4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。
- PCR扩增(核酸扩增区)
1.将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内;
2.设置好通道、样品信息,反应体系设置为25μL;荧光通道选择:
检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,请勿选择ROX参比荧光。
- 推荐循环参数设置:
步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
1 | 1 cycle | 42℃ | 20min | 否 |
2 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
3 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
- 结果分析判定
1.结果分析条件设定 设置Baseline和Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节),以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。
2.结果判断 阳性:检测通道Ct值≤35.0,且曲线有明显的指数增长曲线。
可疑:检测通道Ct值>35.0,且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验,重复试验结果出现Ct值≤35.0和典型扩增曲线者为阳性,否则为阴性。
阴性:样本检测结果无Ct值且无明显的扩增曲线。
- 检测方法的局限性
- 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
- 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;
- 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
- 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;
- 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
- 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;
- 本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
- 质控标准
阴性质控品:无明显扩增曲线且无Ct值显示;
阳性质控品:无明显扩增曲线且无Ct值显示;
以上条件应同时满足,否则实验视为无效。
8.
产品性能指标 阴阳性参考品符合率:5份阳性参考品符合率为100%;10份阴性参考品符合率为100%。
ZD检测限:1.0×10
3copies/mL。
精密度:批内、批间精密度检测Ct值的变异系数(CV)均小于等于3%。
【注意事项】 - 所有操作严格按照说明书进行;
- 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;
- 反应液应避光保存;
- 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
- 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;
- 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
- 实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
- 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
【生产企业】 企业名称:广州维伯鑫生物科技有限公司 邮 编:510663
生产地址:广州市高新技术产业开发区科学城科丰路31号G11栋2层
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