牛结核杆菌PCR检测试剂盒扩增试剂准备(PCR前准备区)
从试剂盒中取出TB PCR反应液、Taq酶及UNG,室温融化并振荡混匀后,2,000rpm离心10sec。
设所需要的PCR反应管管数为n(n=样本数+1管阴性对照+1管强阳性对照+1管临界阳性对照)。
牛结核杆菌PCR检测试剂盒产品特点:
准确:整个过程闭管操作,防止污染,产品(与痰液培养相比)总符合率达94.64%;
灵敏:灵敏度高,Z低检出限可达10菌/mL;
快速:从获得DNA样本到给出结果,只需2-3小时;
友好:获得核酸后,只需一步加样操作,无需PCR后处理,即可自动获得结果;
高通量:在常规荧光定量PCR仪上运行一次,可同时检测94个样本。
牛结核杆菌PCR检测试剂盒使用方法
1.样本处理(样本处理区)
1.1.首先对痰液样本进行目测,若样本中唾液占绝大部分,则需重新采集样本。
1.2.目测合格后,在样本中加入2~3倍体积4%的NaOH溶液,〈采希?50rpm、37℃条件下处理30min或常温下1Hr,使其充分液化(无明显固状物并且吸出时无拖丝现象即为液化完全;若液化不完全,可适当再加入少量4%的NaOH溶液直至液化完全)。
1.3.取液化后的样本900ul以及试剂盒中的阴性对照、强阳性对照和临阳性对照各500ul于1.5ml无菌离心管中,13,000rpm离心10min。
1.4.弃上清(先倒出大部分液体,再用移液器尽量吸干至无明显液滴为止),沉淀中加入1ml灭菌生理盐水,牛结核杆菌PCR检测试剂盒振荡悬浮(注意:按紧离心管盖后,横向按在旋涡振荡器上将沉淀振起),13,000rpm离心10min。
1.5.弃上清,用1ml灭菌生理盐水洗涤沉淀,13,000rpm离心10min。
1.6.弃上清,向沉淀中加入DNA提取液30ul,振荡混匀,2,000rpm离心5sec,放37℃温浴30min,再放入100℃水浴/干浴10min,13,000rpm离心10min,保留上清备用。(如果样本裂解产物当天不使用,请于-20℃保存。)
2.扩增试剂准备(PCR前准备区)
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