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牛p53丝裂原活化蛋白激酶(p53MAPK)ELISA定量分析试剂盒厂家直销常用四种方法的优势介绍:
1、
直接法:将抗原直接固定在固相载体上,加入酶标记的一级抗体,即可测定抗原总量,此一级抗体的特异性非常重要。
优势:操作手续简短,因无须使用二抗可避免交互反应。
2、
间接法:与直接法类似,差别在于一级抗体没有酶标记,改用酶标记的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。
优势:二抗可以加强信号,而且有多种选择能做不同的测定分析,不加酶标记的一级抗体则能保留它最多的免疫反应性。
3、
双抗体夹心法:被检测的抗原包被在两个抗体之间,其中一个抗体将抗原固定于固相载体上,即捕捉抗体,另一个则是检测抗体,此抗体可用酶标记后直接测定抗原的量,或不标记,再透过酶标记的二级抗体来测定抗原的量,这两种抗体必须小心选取,才可避免交互反应或竞争相同的抗原结合部位。
优势:高灵敏、高专一性,抗原无须事先纯化。
4、
竞争法:样本里的抗原和纯化并固定在固相载体上的抗原一起竞争相同的抗体,当样品里的自由抗原越多,就可以结合越多的抗体,而固定抗原就只能结合到较少的抗体,反之亦然,经清洗步骤,洗去自由抗原和抗体的复合物,只留下固定抗原和抗体的复合物,拿来与只有固定抗原的对照组结果相比较,根据呈色差异就可计算出样品里的抗原含量。
优势:可适用比较不纯的样本,而且数据再现性很高。
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