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蛋白酶YZ剂Cocktail,EDTA-free,迷你型,片剂北京价格的品Pai:百奥莱博,是优质的蛋白质研究产品,用于科研目的生化试验项目,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多蛋白酶YZ剂Cocktail,EDTA-free,迷你型,片剂等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。
名称:蛋白酶YZ剂Cocktail,EDTA-free,迷你型,片剂北京价格
规格:1瓶(10片)
英文名:Protease Cocktail, EDTA-free, mini, tablet-form
编号:SY0323
产地:国产|进口
细胞裂解后的蛋白粗提物中含有大量的内源性蛋白酶,这些酶可以降解细胞提取物中的蛋白。因此为了防止蛋白纯化过程中目的蛋白不受蛋白酶的破坏,需要加入蛋白酶YZ剂对其进行活性YZ。
本品是多种常见蛋白酶YZ剂的混合物,包含AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin、Pepstatin A多种成分,广谱YZ来源于动植物、细菌、酵母等组织或细胞内的多种蛋白酶,如丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、氨肽酶、酸性蛋白酶等。另外,本品不含EDTA(一种金属蛋白酶YZ剂),特别适用于活性ZX为金属离子依赖的蛋白。兼容于后续的固定化金属离子亲和层析(Immobilized metal-chelate affinity chromatography, IMAC)、2-D 凝胶电泳以及天然凝胶电泳等蛋白分析实验。
本品以片剂形式装于玻璃瓶内,单片可用于10ml的细胞或组织裂解液。
使用方法
1)取单片蛋白酶YZ剂片剂于10ml溶液中;
2)溶解1min,漩涡混匀即可。【注】:充分溶解后的溶液可能呈现微弱的浑浊,此现象正常。
储存条件:4℃,有效期至少一年。
注意事项
1)本品具有广谱的蛋白酶YZ活性,但是不具有磷酸酶YZ剂活性。若进行磷酸化蛋白的研究,可使用我司的磷酸酶YZ剂混合物(100×)。
2)该蛋白酶YZ剂片剂在室温放置过久可能会引起变色。
3)本品可制备10ml 1×蛋白酶YZ剂,然而对于某些含有特别高浓度蛋白酶的样本可能需提高终浓度到2×或3×。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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·腔肠素h
编号:SY0235
英文名称:Coelenterazine h
规格:1×500μg
本品为粉末形式供应的腔肠素h(Coelenterazine h),是海肾荧光素酶(Rluc)和Gaussia荧光素酶(Gluc)等多种荧光素酶的作用底物,其发光强度比天然腔肠素高10倍以上,适用于报告基因分析。也是水母发光蛋白的辅助因子,可用于检测活细胞中钙离子浓度。
腔肠素(Coelenterazine)是自然界中资源最丰富的天然荧光素,是绝大多数海洋发光生物(超过75%)的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物,比如海肾荧光素酶(Rluc),Gaussia分泌型荧光素酶(Gluc),以及包括水母发光蛋白(aequorin)和薮枝螅发光蛋白(Obelia)在内的光蛋白(Photoproteins)。其发光原理是:以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下,氧化腔肠素,产生高能量的中间产物,并在此过程中发射蓝色光,峰值发射波长约为450~480nm。与甲虫(或萤火虫)荧光素/荧光素酶系统不同,腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷(ATP),因此更便于体内生物荧光的研究。因此,腔肠素常用作基于荧光分析的报告基因检测以及活体动物检测的发光底物。
腔肠素还能在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光,细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子能够增强该自发光信号,因此其也可用来检测细胞/组织内活性氧(ROS)水平。
腔肠素具有能量转移的特性— —生物发光共振能量转移(Bioluminescence Resonance Energy Transfer,BRET),利用此特性,当与荧光蛋白如GFP的突变体(增强的黄色荧光蛋白,EYFP)联合使用,在底物腔肠素存在的情况下,荧光素酶(如Rluc)催化底物发生蓝光,能量随之转移到EYFP上,发出绿光(~530nm)。这两个蛋白的相互作用可以通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系来评估,适用于研究蛋白-蛋白之间的相互关系。另外,由于BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定,消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量,适用于高通量筛选如药物开发。
更为重要的一个功能,水母发光蛋白复合物(Aequorin)由22kDa的水母蛋白(Apoaequorin protein)、分子氧和底物腔肠素组成。只有当钙离子(Ca2+)与该复合物结合后,腔肠素才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide,同时释放出CO2和蓝色荧光(~466 nm)。正是此Ca2+依赖性的反应过程(见图1),使得腔肠素非常适用于监测活细胞内钙离子水平。与常规的荧光钙离子指示剂相比,其主要具有以下几个优点,
1)能检测较大范围的钙浓度 – 从0.1 μM至 >100μM;
2)样品无自体荧光,背景荧光低于使用荧光钙离子指示剂;虽然信号比使用荧光钙离子指示剂弱,但是通过成像仪器可以得到更高的信噪比,因此具有更高的灵敏度。
3)水母发光蛋白复合体能够稳定维持在细胞内,使其能够进行数小时至数天的钙离子监测。
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图1. 腔肠素作为水母发光蛋白辅助因子的Ca2+依赖反应流程
目前商业化的腔肠素应用最普遍的是天然腔肠素(Coelenterazine native),另外还有很多腔肠素衍生物如Coelenterazine h、Coelenterazine 400a、Coelenterazine cp、Coelenterazine f、Coelenterazine hcp、Coelenterazine n等被一一合成。理论上这些腔肠素可用于相同的实验,但是由于其发光波长,细胞膜渗透性,光量子效率上的差异,使得其在相同应用上表现出不同的实验效果。因此非常有必要根据具体实验目的选择最合适的腔肠素底物。
英文别名:2,8-Dibenzyl-6-(p-hydroxyphenyl)-imidazo[1,2a]pyrazin-3-(7H)-one; 2-Deoxycoelenterazine; CLZN-h; h-CTZ
CAS:50909-86-9
分子式:C26H21N3O2
分子量:407.48 g/mol
熔点:142℃±2℃(dec)
UV:l max: 433 nm ± 2 nm
外观:浅黄色至橘色粉末
溶解性:溶于甲醇或者乙醇,不可溶于DMSO
纯度:>99%(TLC)
结构:
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运输和保存方法:冰袋运输。粉末-20℃避光干燥保存,保存在惰性气体下以避免接触空气。
注意事项
1)腔肠素h粉末或者储存液使用惰性气体-氮气或氩气,在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃,长期保存于-70℃。管内即使有少量空气进入,也可能造成腔肠素h氧化失活,使量化分析的结果难以在不同试验间进行比较。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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