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       细胞培养注意事项问题解答
 
       细胞培养技术解答
 四、细胞培养常用试剂使用问答
1.谷氨酰胺使用方法是什么？
    答：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故4℃下放置1周可分解50%，使用中单独配制，置-20℃冰箱中保存，用前加入培养液中。
2.碳酸氢钠在室温条件存放是否稳定？
答：碳酸氢钠白色粉末，或不透明单斜晶系细微结晶。比重2.159。无臭、味咸，可溶于水，微溶于乙醇。其水溶液因水解而呈微碱性，受热易分解，在65℃以上迅速分解，在270℃时完全失去二氧化碳，在干燥空气中无变化，在潮湿空气中缓慢分解。
3.培养细胞生长减慢的原因有哪些？其解决办法有哪些？
    答：可能得原因有：更换了不同的培养液或血清；培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子等耗尽或缺乏或已被破坏；培养物中有少量细菌或真菌污染；试剂保存不当；比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验找出可能的原因。
        解决办法：增加起始培养细胞浓度；让细胞逐渐适应新培养液；换入新鲜配制培养液；补加谷氨酰胺或生长因子等；用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物，或用抗生素CJ；血清需保存在-5℃到-20℃；培养液需在2－8℃避光保存；含血清完全培养液在2-8℃保存，并在2 周内用完；分离培养物，检测支原体。
4.L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？
    答：L-谷氨酰胺在细胞培养时非常重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，降解率随保存温度而变。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。
5.细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？
    答：不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0 , 温度 37 oC 其作用能力。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反复冲洗细胞培养瓶，以便于将含血清的培养基冲洗干净，这样就能大大提高消化液的消化能力。通常使用的消化液浓度为：
     (1)0.05％胰蛋白酶＋0.02％EDTA；
     (2)0.25% 胰蛋白酶
     多数细胞传代消化可使用0.25％胰蛋白酶＋0.02％EDTA这种消化液。
6.二价离子YZ胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酶时加入EDTA的目的是什么？
    答：二价离子的确YZ胰蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持YZ胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前，用EDTA清洗细胞，以消除来自培养基中所有的二价离子。
7.GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？
    答：GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽，是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解
8.培养基中丙酮酸钠的作用是什么？
    答：丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。
9.Hank′s 平衡盐溶液(HBS)和Earle′s平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别？
    答：HBS和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagle′s (2.2g/L)中比在Hanks′ (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagle′s液在空气水平的CO2 中，溶液会变碱，Hanks′液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagle′s液。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks′液就可以了。
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