YT039 SDS裂解液

编号：YT039

规格：100ml

品Pai：百奥莱博

英文名：SDS Lysis Buffer

产地：国产|进口

本品是一种比较强烈的细胞组织裂解液。SDS裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、ChIP(染色质免疫共沉淀，chromatin immunoprecipitation)等。



SDS裂解液的主要成分为50mM Tris (pH8.1)，1% SDS，以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种YZ剂。可以有效YZ蛋白降解。



用SDS裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用百奥莱博的BCA蛋白浓度测定试剂盒(YT036/YT037)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。



储存条件：-20℃，有效期一年。



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·化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒

编号：YT032

英文名称：Chemiluminescent Biotin-labeled Nucleic Acid Detection Kit

规格：1000cm2

本试剂盒是一种通过Streptavidin-HRP及后续的ECL试剂来实现化学发光检测Biotin标记核酸的检测试剂盒。适用于Southern blot、Northern blot、ribonuclease protection assay (RPA)或EMSA等实验中，采用生物素标记的DNA或RNA探针时的检测。本试剂盒不适用于生物素标记蛋白的检测。



本试剂盒采用了高质量的Streptavidin-HRP Conjugate，HRP和Streptavidin共价交联的比例大于3，这样比采用Streptavidin和Biotin-HRP conjugate两种试剂进行检测要更方便，并且灵敏度更高。采用了非特异性结合比avidin更低的strepatavidin，使检测结果背景更低灵敏度更高。



本试剂盒没有提供生物素探针标记相关的试剂，生物素标记的DNA探针或EMSA探针的制备可以相应地使用百奥莱博的生物素标记DNA试剂盒（TdT加尾法）或EMSA探针生物素标记试剂盒(YT189)。本试剂盒可以用于检测至少10块10 x 10cm有生物素标记EMSA探针的膜，即共1000cm2。



试剂盒组份：

ECL A液	55ml
ECL B液	55ml
Streptavidin-HRP Conjugate	100μl
封闭液	380ml
洗涤液(5X)	250ml
检测平衡液	250ml

储存条件：-20℃。



使用说明：

1. 在使用Biotin标记探针的情况下，完成Southern、Northern杂交及后续洗涤后，或RPA的转膜和交联后，或EMSA的转膜和交联后，可以使用本试剂盒开始检测。下面的检测过程中溶液的用量是用于一片10x10cm膜的量。如果膜较大或较小，各溶液的用量可以按比例放大或缩小。

2. 37-50ºC水浴溶解封闭液和洗涤液。

注意：封闭液和洗涤液必须完全溶解后方可使用，封闭液和洗涤液可以在室温至50ºC之间使用，但必须确保这两种溶液中均无沉淀产生，在冬天需特别注意。

3. 取一合适的容器加入15ml封闭液，再放入交联过的含有样品的尼龙膜。在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动15分钟。

4. 取7.5µl Streptavidin-HRP Conjugate加入到15ml封闭液中(1:2000稀释)，混匀备用。

5. 去除封闭液，加入上一步中配制的15ml含有Streptavidin-HRP Conjugate的封闭液。在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动15分钟。

6. 取25ml 洗涤液(5X)，加入100ml重蒸水或MilliQ级纯水，混匀配制成125ml洗涤液。

7. 将尼龙膜转移至另一装有15-20ml洗涤液的容器内，漂洗1分钟。

8. 去除洗涤液，加入15-20ml洗涤液，在侧摆摇床或水平摇床缓慢上洗涤5分钟。

9. 重复步骤8三次(共洗涤四次)，每次洗涤时间均约为5分钟。

10. 将尼龙膜转移至另一装有20-25ml检测平衡液的容器内，在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动5分钟。

11. 取5ml ECL A液和5ml ECL B液混匀，配制成ECL工作液。注意：ECL工作液必须现配现用。说明：从本步骤起操作方法和注意事项同Western实验的荧光检测。

12. 取出尼龙膜，用吸水纸吸去过多液体。立即将膜的样品面向上，放置到处于水平桌面上的洁净容器内或保鲜膜上。

13. 在尼龙膜的表面小心加上步骤11配制好的共10ml ECL工作液，使工作液完全覆盖尼龙膜。室温放置2-3分钟。

14. 取出尼龙膜，用吸水纸吸去过多液体。将尼龙膜放在两片保鲜膜或其它适当的透光薄膜中间，并固定于压片暗盒(也称片夹)内。

15. 用X光片压片1-5分钟。可以先压片1分钟，立即显影定影，然后根据结果再调整压片时间；也可以直接分别压片30秒、1、3、5分钟或更长时间，然后一起显影定影观察结果。





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