蛋白表达与纯化技术服务

蛋白表达与纯化技术服务 --Z低3000.00/蛋白，无风险！步骤1. 目标基因全基因合成：

1. 
   从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。如果我们的cDNA文库中有这个基因，我们免费提供给客户。
   


2. 
   根据选用的表达系统对cDNA进行密码子优化，密码子优化。
   


3. 
   合成设计好的基因序列。
   

提供给客户：目标基因（在T载体或常规穿梭载体上）及测序报告。 

价格：3.80元/碱基,如果客户直接提供构建好的质粒，则免去这部分费用． 

时间：2~3周，根据基因的大小而定.详见全基因合成服务

步骤2. 目标基因亚克隆：

1. 
   扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
   


2. 
   将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
   


3. 
   测序验证构建质粒的准确性。
   


4. 
   闪晶生物免费提供如下表达载体：
   

	expression Vector		Promoter		Tag
	pET3a, pET11a, pET24a		T7/ac		None or T7 Tag
	pET32a		T7/ac		TRX & HIS
	pET41a		T7/ac		GST & HIS
	pET22b, pET25b, pET26b		T7/ac		Secret
	pET28a, pET15b, pRSETb		T7/ac		HIS
	pET50b, pET43a		T7/ac		Nus, HIS
	pPEPTIDE		T7/ac		HIS
	pMAL-c2x		T7/ac		MBP
	pGEX4T, pGEX5X, pGEX6P		T7/ac		GST
	pQE30		T5		HIS
	pTrcHisB		Trc		T7, HIS
	pTWIN		T7/ac		Intein, CBD
	pBV220		PRPL		None

提供给客户：正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。 

价格：免费  

时间：1-2周 

步骤3. E. coli表达菌株转化及筛选：

1. 
   扩增并抽提构建好的表达质粒。
   


2. 
   将表达质粒转化到GX的E.Coli表达菌株中。
   


3. 
   至少挑选5个阳性克隆于LB培养基中扩增并诱导表达目标蛋白。
   


4. 
   SDS-PAGE电泳检测培养后中目标蛋白的表达情况，并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。
   


5. 
   可提供表达菌株：DH5α, 0, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。
   

提供给客户：重组质粒的表达菌株及表达检测报告。 

价格：免费 

时间：1周 

步骤4. 目标蛋白表达及纯化：

1. 
   摇瓶培养1L重组细菌，诱导表达目标蛋白。
   


2. 
   通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
   


3. 
   利用蛋白酶去除不需要的纯化标签，再纯化获得所需的目标蛋白（可选，构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点）。
   


4. 
   通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制终产品质量。
   


5. 
   通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
   

提供给客户：纯化好的目标蛋白1~5mg及纯化报告。 

价格：

1. 如果目标蛋白含有亲和标签（His-tag or GST-tag） 

5,000元（目标蛋白纯度>80%，不切除标签） 

5,500元（目标蛋白纯度>90%，不切除标签） 

6,000元（目标蛋白纯度>80%，切除标签） 

6,500元（目标蛋白纯度>90%，切除标签） 

2. 如果目标蛋白不含有亲和标签 

8,000元（目标蛋白纯度>80%） 

9,000元（目标蛋白纯度>90%） 

3. 如果没有获得目标蛋白，则不收取任何费用(客户直接提供构建好的质粒时)。 

时间：2~3周, 蛋白表达订单下载 

备注：

1. 因为每个重组蛋白的表达量及纯化得率都不相同，我们终根据实际情况将给客户提供少1mg，多10mg的目标蛋白，所收取的费用是相同的。 

2. 我们提供的终产品一般为保存于常规的缓冲液（Tris-HCl，PBS或乙酸-乙酸钠缓冲液）中蛋白质溶液，并且其中不含有尿素或盐酸胍等变性剂。 

3. 每次Western blot检测多7个样品，因为要加入阳性对照，阴性对照以及Marker。本步骤只包含一次免费检测，如果需要更多次检测则费用为1500元/次。我们可以免费为客户提供抗His-tag的一抗，如果客户需要使用其他一抗，则需要客户提供。详见 Western Blot 检测服务.