基因敲入(Knock-in)是在目的基因位置引进特定的突变或外源基因,比如在目的基因引入点突变(模拟人类遗传疾病模型),或将报告基因(如EGFP、RFP、mCherry、YFP、LacZ、Luciferase等)或需要表达的功能性cDNA(如Cre、Dre等)通过同源重组的方式引入目的基因的特定位点,从而使报告基因或其他cDNA的表达与目标基因的表达一致。若用报告基因或cDNA取代小鼠本身的基因,则敲除和敲入同时发生。将人源基因替换小鼠内源基因或将人源cDNA插入到小鼠内源基因ATG位置,还可定制人源化小鼠模型。
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模拟人类遗传机制,探索致病机制
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示踪基因表达
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进行谱系示踪,追溯细胞起源
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将小鼠基因人源化,加速药物研发
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将分子遗传学工具引入小鼠模型中
基因敲入模型包括:
通过CRISPR基因编辑技术,构建一个基因敲入小鼠模型一般需要6-9个月。
通过ES细胞打靶技术,构建一个基因敲入小鼠模型一般需要9-12个月。
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条件性点突变
将点突变(人类致病候选点突变)与Cre-LoxP系统结合,引入到小鼠同源基因对应位置,可实现组织特异性点突变。
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