QIAGEN Plasmid Kits应用重力流阴离子交换柱纯化转染级质粒DNA。该试剂盒可纯化获得至多20 μg的质粒DNA。离心获得澄清的裂解产物和异丙醇沉淀。
性能
QIAGEN Plasmid Mini Kits利用重力流QIAGEN-tip 20阴离子交换柱GX纯化质粒DNA。只需3–10 ml培养基,即可纯化获得多达20 µg的高拷贝质粒DNA。(培养容量取决于质粒拷贝数、插入片段大小、宿主菌株和培养基。)QIAGEN Plasmid Kits纯化的质粒DNA适合多种应用,如:转染(参见Transfection efficiency versus plasmid purification method)、克隆和体外转录。
原理
QIAGEN-tips内独特的阴离子交换树脂专为纯化核酸设计。它独特的分离特性,使纯化的DNA的纯度相当于连续2次CsCl梯度离心得到的DNA纯度。预装的QIAGEN-tips利用重力流原理工作,缩短了纯化质粒的手动操作时间。整套QIAGEN质粒纯化体系避免使用苯酚、氯仿、溴化乙锭和CsCl等有毒物质,减小对使用者和环境的危害。
操作流程
使用QIAGEN Plasmid Kits,细菌裂解物通过离心澄清。澄清后的裂解物上样到阴离子交换柱,质粒DNA在适当的低盐条件和pH条件下与树脂进行选择性结合。RNA、蛋白质、代谢产物和和其它低分子量杂质用中盐洗涤液去除,用高盐缓冲液洗脱纯质粒DNA(参见QIAGEN Plasmid Kit procedures)。纯化得到的DNA用异丙醇沉淀浓缩和脱盐后,通过离心收集。
应用
QIAGEN Plasmid Kits纯化得到的质粒DNA适合多种应用,如:
- 转染
- 克隆
- PCR
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体外转录