17-0891-09

Percoll  细胞分离液（1.131）
货号：P19020
规格：100ml/1l
说明：适合分离细胞，亚细胞成分和大病毒(>70S)，渗透压均匀，
粘度低，可调至生理离子强度和pH，分离条件温和，对细胞
无毒性，可以灭菌消毒。
密度：1.3g/ml
储存条件：2-8℃
From Pharmacia 17-0891-09
说明：Percoll是一种包有乙的硅胶颗粒。渗透压很低(<20mosm／kg H２O), 粘度也很小，可形成高达1.3g／ml密度，采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200～1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。
 
一、各种动物细胞的采集方法
1. 大鼠、小鼠的采集：用颈椎脱臼法处死动物,剥离出胸骨或股骨，用注射器吸取少量的F 液，冲洗出胸骨或股骨中全部液，以500g（约1800 转/分）离心20 分钟，弃上清。沉淀以F 液重复洗涤一次后用全血及组织稀释液悬起（细胞浓度为2×108-1×109个/ml），备用。
2. 大动物的采集：
A．穿刺点定位
（1）胸骨：穿刺部位在胸骨中线,胸骨体与胸骨柄连接处,或选胸骨上1/3 部。
（2）胫骨：穿刺部位在胫骨内侧,胫骨上端的下方1 厘米处。
（3）肋骨：穿刺部位在第5～7 肋骨各自的中点上。
（4）髁骨：穿刺部位在髁前上棘后2～3 厘米的髁嵴。
（5）股骨：穿刺部位在股骨内侧面,靠下端的凹面处。
B．穿刺方法
（1）实验动物按要求固定，穿刺部位去毛、消毒、麻醉，要求局部麻醉范围直达骨膜，也可作全麻。
（2）操作人员带消毒手套，确定穿刺点，估计从皮肤到的距离并依此固定穿刺针长度。左手拇、食指绷紧穿刺点周围皮肤，右手持穿刺针在穿刺点垂直进针，小弧度左右旋转钻入，当有落空感时表示针尖已进入腔。用左手固定穿刺针，右手抽出针芯，连接注射器缓慢抽吸组织，当注射器内抽到少许时立即停止抽吸，收集细胞加入4-5ml F 液混匀，以500g（约1800 转/分）离心20 分钟，弃上清，沉淀以F 液重复洗涤两次后用全血及组织稀释液悬起（细胞浓度为2×108-1×109 个/ml），备用。
（3）左手压住穿刺点周围皮肤，迅速拔出穿刺针，用棉球压迫数分钟。如穿刺的是肋骨，除压迫止血外，还需胶布封贴穿刺点，防止发生气胸。
3. 人的采集：
临床方法收集细胞加入4-5ml F液混匀，以500g（约1800转/分）离心20分钟，弃上清，沉淀以F液重复洗涤两次后用含20%胎牛血清的全血及组织稀释液悬起（细胞浓度为2×108-1×109个/ml），备用。
二、淋巴细胞分离方法
1．取 1ml 细胞悬液（制备方法详见“一、细胞的采集方法”）小心叠加在C 液之液面上（比例为1：1），20℃±2℃，400g（约1500 转/分），离心20 分钟（半径15cm 水平转子）。
此时离心管中由上至下细胞分四层。DY层;为稀释液层。第二层；为环状乳白色含所需淋巴细胞层。第三层；为透明分离液层。第四层；为红细胞层。收集第二层细胞放入含细胞洗涤液4-5 毫升的试管中，充分混匀后，以500g（约1800 转/分）离心20 分钟。沉淀经反复洗涤2 次即得所需淋巴细胞。
注： 提取率约为80%。
三、注意事项
A． 本分离液是敏光型的，在运输和贮藏过程中应在18℃-25℃避光保存，启封后置4℃保存避免微生物污染。另外，本品为真空包装，未启封前置于10℃ 以下易出现白色结晶，影响分离效果。
B． 待分离的样本要求新鲜，避免冷冻和冷藏。分离液和所分离样本一定在20℃水浴箱中复温20 分钟保证分离液和所分离样本温度在20℃±2℃时分离效果，且所有操作过程一定要在无菌条件下进行。
C． 由于各品Pai离心机的性能不同，国内南北地区温度环境和四季的差异，可能影响分离效果，用户可以调节离心转数，调节离心的时间，摸索ZJ的分离条件（具体分离条件各实验室自定）。
D． 使用无静电反应的离心管，推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。
四、产品性能指标
pH 7.0-7.5
渗透压 280-340mOsmol/kg
内毒素 ≤0.5EU/ml
无菌 直接接种培养14 天后培养基澄清
澄明度及不溶性颗粒物 每50ml 溶液中含10μm 以上的不溶性微粒20 粒以下，
含25μm 以上的不溶性微粒5 粒以下
五、贮藏及保存期限
18℃-25℃避光保存，有效期两年。启封后置4℃保存，有效期一周。
注：若保证无微生物污染，启封后可置4℃长期保存。但应注意保存温度较低时本分离液易
出现白色结晶，影响分离效果。
 
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