技术概述
质谱多反应监测技术/选择反应监测(MRM/SRM)是对复杂混合物中目标蛋白质进行准确定量的重要技术手段。MRM/SRM作为一种质谱检测的分析方法,具有特异性强、灵敏度高、准确度高、重现性好、线性动态范围宽、自动化高通量的突出优点,是目前最灵敏的质谱检测模式,被誉为质谱的“金标准”。
通过MRM/SRM技术进行实时的定量监测可以进行药代动力学研究、临床诊断、违禁药物检查、食品化妆品等工业质量控制、环境检测、农业植物学研究以及代谢组学和基于蛋白组学的生物标志物发现、蛋白质翻译后修饰等相关研究。技术原理
MRM/SRM技术是一种基于已知或假定的反应离子信息,有针对性地选择数据进行质谱信号采集,对符合规则的离子进行信号记录,去除不符合规则离子信号的干扰,通过对数据的统计分析从而获取质谱定量信息的质谱技术。 该方法首先检测到具有特异性的母离子,然后只将选定的特异子离子进行质谱信号的采集。ZZ,通过合成同位素形成的目标肽段,将已知浓度的内标肽与待测样品混合,选择特定母子离子对获得不同的色谱检出信号,比较两者的信号强度值,实现目的蛋白质的JD定量。技术优势
- 质谱定量方法的金标准,被称为“基于质谱的ELISA”;
- 当今基于质谱重现性的技术
- 通量高,一次实验可以平行定量几十到几百个蛋白;
- 重复性高,可以实现四个数量级的定量,变异小;
- 不需要抗体,因此适用于验证及定量因缺少抗体而无法采用werstern或者ELISA进行定量的蛋白,如同源较高的蛋白家族,带有翻译后修饰蛋白(如磷酸化,甲基化蛋白等等),植物、微生物、模式生物的蛋白
实验流程
客户案例
应用领域
- iTRAQ实验中差异蛋白后续验证;
- Label free 差异蛋白后验证;
- 蛋白JD定量;
- 肽段JD定量;
- 疾病标志物定量,建立诊断模型;
- 磷酸化蛋白定量,甲基化蛋白定量;
- 其他翻译后修饰蛋白定量;
- 通路整体蛋白定量分析。
送样须知
蛋白提取物:浓度>1μg/μl,蛋白质总量 >300μg;
细胞样品:细胞量>107次方;
组织样品:动物、微生物组织湿重>50mg | 植物组织>1000mg ;
体液样品:血液体积>500μl。
参考论文
[1] Chen Chen, Xiaohui Liu, Weimin Zheng, Lei Zhang, Jun Yao, and Pengyuan Yang,Screening of Missing Proteins in the Human Liver Proteome byImproved MRM-Approach- Based Targeted Proteomics ,Journal of Proteome Research 2014, 13, 1969-1978
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[3] Picotti P, Aebersold R. Selected reaction monitoring-based proteomics: workflows, potential, pitfalls and future directions. Nature Methods. 2012; 9(6): 555-66.
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