规格:50头份
介绍:口蹄疫(Foot and Mouth Disease ,FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一种高度接触性传染病,对易感的偶蹄动物具有严重的潜在经济危害。其特征是在口、舌、唇、鼻、蹄、乳房发生水泡,并溃烂形成烂斑。世界卫生组织(OIE)将其列为必须通报疾病。我国2008年修订的《一、二、三类动物疫病病种明录》将其列为一类动物疫病。
用途:该试剂盒用于对FMDV进行检测,有助于对FMDV的实验室诊断、监测和流行病调查。
原理:本试剂盒采用一步法实时荧光反转录聚合酶链式反应(One-Step Real Time RT-PCR) ,结合Taqman技术,对特异核酸进行定性或定量检测。
试剂盒的组成
试剂名称 | 数量 | ||
FMD反应液 | 550μL×1管 | ||
FMD酶 | 40μL×1管 | ||
FMD引物探针 | 100μL×1管 | ||
无核酸水 | 1000μL×1管 | ||
FMD阴性对照 | 1000μL×1管 | ||
FMD阳性对照 | 150μL×1管 |
保存期及贮藏条件:本产品-20℃避光可保存12个月。
样品收集,操作和储存
1. 选择发病早期,无菌采样并立即送往实验室进行病毒检测。
检测步骤
1.核酸提取
2.扩增试剂的准备
试剂名称 | N份用量(20μL 体系) | ||
FMD反应液 | 10μL×(N+1) | ||
FMD酶 | 0.5μL×(N+1) | ||
FMD引物探针 | 1.8μL×(N+1) | ||
无核酸水 | 5.7μL×(N+1) |
将各试剂按照表中用量加入无菌离心管中,充分混匀,短暂离心后在PCR反应管中分别加入18μL混合液。
3.加样
4.荧光PCR扩增与信号收集
循环数 | 温度(℃) | 时间 | 数据收集位点 | ||||
1 | 45 | 15min | - | ||||
1 | 95 | 2min | - | ||||
40 | 95 | 15s | - | ||||
| 60 | 1min | 数据收集 |
结果成立原则
阳性对照:CT值<30并有明显的扩增曲线。
阴性对照:无CT值或者CT值>37,线性为直线或者轻微斜线,无明显扩增曲线。
以上要求需同时满足,否则本次实验无效,需要重新进行。
结果判定
CT值 | 样本检测结果 | ||
<30并有明显的扩增曲线 | 阳性,样本中检测出FMDV。 | ||
30-37 | 可疑,需重复检测。若第二次检测CT值仍为30-37并有明显扩增曲线则判定为阳性,否则为阴性。 | ||
>37并无扩增曲线 | 阴性,样本中未检测出FMDV。 |
注意事项
1.反应体系应在特定配液区或者超净工作台中配制,整个实验过程严格控制污染。
2.PCR整个试验分配液区、模板提取区、扩增区。流程顺序为配液区→模板提取区→扩增区。严禁器材和试剂倒流。
3.使用不含荧光物质的一次性手套,一次性离心管。
4.反复冻融试剂将减低检测灵敏度,本试剂盒应在5次内用完.
5.-20℃保存的各试剂管使用前应在室温下完全融化,液体融化后需彻底混匀,2000 rpm离心15 s ,使用后立即放回-20 ℃。
6.在RNA提取过程中,避免RNA酶污染,尽量缩短操作时间。
7.注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂,试剂盒之间的成分不要混用。
8.PCR反应管避免气泡存在,管盖需盖紧。
9.不同批次的试剂盒勿混用。
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