红色荧光标记內源exosome RNAs绿色荧光标记内部exosome 蛋白 √ 产品介绍Exosome是由多种细胞在体内或体外分泌的60-180nm的膜性小囊泡。根据分泌的细胞类型不同,exosome中所含有RNAs和蛋白成分也不相同。因此,exosome为疾病生物标记物的发现和功能特性研究提供了很好的生物学材料。
这些纳米级”小卡车” exosome将信号RNAs和蛋白从一个细胞运输到其他细胞。SBI新产品Exo-Glow™试剂盒,则使得研究者们能够荧光标记內源的exosome RNAs为
红色,标记内部exosome蛋白为为
绿色,从而达到使用荧光显微镜
实时追踪exosome细胞内相互作用和物质运输!
√ 产品原理Exo-Red染色原理基于Acridine Orange (AO, 吖啶橙)化合物,AO可以透过胞膜,荧光标记exosome内部的单链RNAs。通过荧光显微镜可以观察红色荧光标记的exoRNAs运输到靶细胞。
Exo-Green染色原理基于Carboxyfluorescein succinimidyl diacetate ester (CFSE, 羧基荧光素乙酰乙酸)化合物 ,CFSE也可以透过胞膜。CFSE进入exosome后,被exosome内部的酯酶水解消化二乙酸残基(Savina A., et al., 2002)。激活的CFSE发出绿色荧光,并耦合到蛋白氨基末端。通过荧光显微镜可以观察绿色荧光标记的exoProtein转运到靶细胞。
√ 购买信息 货号 | 规格 | 产品 | 描述 | 价格 | |
EXOR100A-1 | 20 rxns | Exo-Red exosome RNA fluorescent label | exosome RNA 红色荧光标记产品 | 4418.00 | |
EXOG200A-1 | 20 rxns | Exo-Green exosome protein fluorescent label | exosome 蛋白 绿色荧光标记产品 | 4418.00 | |
EXOC300A-1 | 10 rxns each | Exo-Red + Exo-Green exosome cargofluorescent label Combo | exosome RNA红色荧光标记和蛋白绿色荧光标记产品组合 | 5039.00 | |
√ 实验步骤标记exosome
- 在1.5mL EP管中用500 ul 1x PBS重悬富集到的exosome;在重悬的exosome中加入50 ul 10x Exo-Red 或者Exo-Green;
- 轻弹管壁或上下颠倒以混匀; 注意不可涡旋;
- 混合物在37℃ 孵育10分钟(无需rotation)
- 加入100 ul ExoQuick-TC 试剂以终止标记反应,上下颠倒6次以混匀;
- 将混合物置于冰上(或4℃)30分钟;
- 14000rpm离心3分钟;
- 弃去上清液,500 ul 1x PBS重悬标记好的exosome,待用。
Exo-Glow标记的exosomes加入靶细胞
- 6孔板每孔约1x10^5个细胞;加入100 ul 标记好的exosome;(可根据实验需要调整)
- 培养2-24小时后,按照以下参数使用荧光显微镜观察:
Exosome Label | Excitation | Emission | Filter setting |
Exo-Red | 460 nm | 650 nm (red) | Typical RFP filter set |
Exo-Green | 494 nm | 521 nm (green) | Typical GFP filter set |
√ 产品应用实例使用Exo-Red 或者 Exo-Green标记人exosome,然后将荧光标记的exosome加入体外培养的靶细胞HEK293,并在一定时间后观察:
Exo-Red标记exosome(2天后):追踪RNA运输 Exo-Green标记exosome(2小时后):追踪蛋白运输 √ 运输与保存Exo-Glow试剂盒组分置于棕色避光管中干冰运输,保存于-20℃。避免反复冻融。产品收到后4℃保存。有效期自收到产品后至少1年。
温馨提示:不可用于临床ZL。