罗氏LightMix® qPCR检测试剂盒便捷的SNP分型检测试剂

罗氏LightMix^®  qPCR检测试剂盒

便捷的SNP分型检测试剂

除了对感染性病原体进行定性/定量的检测应用，实时荧光PCR系统还能应用于遗传变异的研究。

等位基因单核苷酸多态性（SNP）和结构变异是个体和群体中遗传变异的基础。这种变异影响了个体在患病风险和治LX果上的不同。LightMix^® 提供了一系列检测试剂盒，为医学基础研究领域中SNP基因分型与个体疾病预测、用药ZL及疾病转归的相关性，提供了强大且便捷的研究工具。

LightMix^®试剂盒采用杂交探针结合熔解曲线分析的基因分型方法，能将qPCR扩增和分型检测在同一反应管内一次完成，整个反应过程在1.5h内完成，并免去PCR-RFLP、芯片法等后续对PCR产物的处理分析过程，闭管检测大大降低了实验室PCR扩增产物污染的可能性。

LightMix^® kit

MTHFR C677T基因多态性检测试剂盒

5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR) 是人DNA合成及同型半胱氨酸代谢中的关键酶，催化5,10-亚甲基四氢叶酸转变为5-甲基四氢叶酸，而后者为同型半胱氨酸转化为蛋氨酸的甲基供体。MTHFR 677C>T突变可造成其编码的氨基酸由丙氨酸变成缬氨酸，引起耐热性和酶活性下降。

目前国际及国内研究结果表明^[1]，杂合突变的MTHFR677CT酶活性下降30%，纯合677TT酶活性下降65%以上。在低叶酸的环境下，纯合677TT可显著升高血浆同型氨酸浓度，从而引起静脉栓塞、肺栓塞、动脉粥样硬化、脑卒中等疾病，携带MTHFR 677TT基因型的母亲在低叶酸环境情况下生育神经管缺陷的病儿的风险也大大增加。

试剂盒检测原理：

使用特异性引物对扩增MTHFR上233bp的片段，杂交探针序列位于233bp的片段中，并覆盖MTHFR677位点，杂交探针序列与MTHFR677野生型序列完全匹配。仅当探针与目标片段序列结合时，经由qPCR系统的激发探针产生荧光信号。

熔解曲线分析以往常用于SYBR Green检测反应后，扩增产物特异性的判断，这是基于长度和序列不同的双链DNA片段具有不同的热稳定性，表现出片段特异性的Tm值，即使得双链DNA解链一半的温度。而在LightMix^® 检测试剂盒中，杂交探针在扩增反应后仍然保持其完整性，在较低温度下与DNA扩增产物片段复性，在随后逐渐升温的过程中，探针/模板结合物在达到Tm值后探针从模板上脱离，导致荧光信号骤减。如有SNP存在，即MTHFR 677C>T突变，突变序列与探针结合物产生一个碱基位点的错配，导致杂交复合体的热稳定性降低，其熔解峰温度将显著低于野生型的基因序列。

运行常规的qPCR反应程序，进行目标片段的扩增和荧光信号检测，在ZH阶段运行熔解曲线分析温度程序，分析软件生成的熔解曲线即可得到SNP分型检测结果。

LightMix^® kit 分型检测优势

  在qPCR平台上实现高通量和自动化的分型检测。

  基于熔解曲线分析，杂交探针性能稳定，获得易辨别和稳定一致的ΔTm。

  与基于水解探针的分型方法相比，特异性和准确性更佳。

  可用于发现未知的突变类型。

  在已知的对比实验中，与测序方法进行序列分析的分型结果吻合度达到100%。

  闭管反应，避免开盖引起的PCR扩增产物污染。

多项SNP分型检测试剂用于心血管疾病相关的遗传变异研究

药物代谢相关及其他基因遗传变异研究

说明：

参考文献 [1] ：Quian, X., Lu, Z. , Tan, M. et al. A meta-analysis of association between C677T polymorphism in the methylenetetrahydrofolate reductase gene and hypertension. European Journal of Human Genetics 15, 1239-1245, 2007

产品仅供生命科学研究使用，不可用于诊断程序

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