超级杂交液 ( 原位杂交 )10mL使用说明书注意事项:
1.从少量样品(1-10mg组织或102-104细胞)中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品,沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml是不影响一链的合成,也不影响PCR反应。
2.匀浆后加之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
3.分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机,2600×g离心30-60分钟。
超级杂交液 ( 原位杂交 )10mL使用说明书操作说明:
1.将待测种子用温水(30-35℃)浸泡2~6h,使种子充分吸胀。
2.随机取种子100粒,沿种胚ZX线纵切为两半,将每粒种子的一半分别置于两个培养皿中,备用。
3.(可选)可将其中一半种子置于沸水中煮沸5min,杀死细胞,作为阴性对照。
4.向含有种子的培养皿中加入TTC溶液,以浸没种子为度。
5.放入30-35℃的恒温箱内保温30min-1h。
6.倒出TTC染色液,用自来水冲洗2~3次,立即观察种子着染况。
超级杂交液 ( 原位杂交 )10mL使用说明书主要优级纯、分级纯和化学纯3种:
(1)优级纯(GR:Guaranteed reagent),又称一级品或保证试剂,99.8%,这种试剂纯度Z高,杂质含量Z低,适合于重要精密的分析工作和科学研究工作,使用绿色瓶签。
(2)分析纯(AR),又称二级试剂,纯度很高,99.7%,略次于优级纯,适合于重要分析及一般研究工作,使用红色瓶签。
(3)化学纯(CP),又称三级试剂,≥ 99.5%,纯度与分析纯相差较大,适用于工矿、学校一般分析工作。使用蓝色(深蓝色)标签。
(4)实验试剂(LR:Laboratory reagent),又称四级试剂。
D-苯甘氨酸乙酯盐酸盐 L-Homophenylalanine BR,98% M81893 1克
L-精氨酸甲酯 D-Homophenylalanine BR,98% M81894 25克
L-酪氨酸叔丁酯 DL-Homophenylalanine BR,98% M81895 1克
N-乙酰-L-色氨酸 L-Homophenylalanine ethyl ester hydrochloride BR,98% M81896 1克
N-乙酰-L-丙氨酸 BOC-L-Homophenylalanine BR,98% M81897 5克
N-乙酰-D-色氨酸 BOC-D-Homophenylalanine BR,98% M81898 1克
N-乙酰-D-亮氨酸 Sodium Glycinate BR,98% M81899 1克
N-乙酰-L-脯氨酸 L-Prolinol BR,98% M81900 1克
N-乙酰-D-脯氨酸 Creatine BR,98% M81901 5克
芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺 N-Acetyl-L-Valine BR,98% M81902 25克
2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 N-Acetyl-DL-tryp tophane BR,98.5% M81903 5克
CBZ-L-缬氨酸 N-Acetyl-glycine BR,99% M81904 25克
D-异亮氨酸 D-Tryptophan methyl ester hydrochloride BR,98% M81905 5克
β-丙氨酸乙酯盐酸盐 L-Cysteine methyl ester hydrochloride BR,99% M81906 25克
L-丙氨酰胺盐酸盐 D-Phenylalanine methyl ester hydrochloride BR,98% M81907 25克
D-天冬酰胺一水物 L-Alanine methyl ester hydrochloride BR,98% M81908 5克
D-谷氨酰胺 D-Alanine Methyl Ester Hydrochloride BR,98% M81909 5克
L-脯氨酰胺 D-Proline methyl ester hydrochloride BR,98% M81910 5克
BOC-L-苯丙氨醇 L-Tyrosine methyl ester hydrochloride ACS,98% M81911 5克
48T
sCD30(Mouse soluble cluster of differentiation 30) Elisa Kit 小鼠可溶性CD30 48T
sMHC-2(Mouse soluble myosin heavy chain 2) ELISA Kit 小鼠可溶性肌球蛋白重链 48T
sMHC-1(Mouse soluble myosin heavy chain 2) ELISA Kit 小鼠可溶性肌球蛋白重链1 48T
MUCC(Mouse Mucin-5 subtype AC) ELISA Kit 小鼠粘蛋白/粘液素C 48T
ACE(Mouse Angiotensin converting enzyme) ELISA Kit 小鼠血管紧张素转化酶 48T
ANG- II (Mouse angiotension II ) ELISA Kit 小鼠血管紧张素Ⅱ 48T
TPO-Ab(Mouse anti-Thyroid-Peroxidase antibody) ELISA Kit 小鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体 48T
BDNF(Mouse Brain derived neurotrophic facor) ELISA Kit 小鼠脑源性神经营养因子 48T
AIF(Mouse apoptosis inducing factor) ELISA Kit 小鼠凋亡诱导因子 48T
ALP(Mouse alkaline phosphatase) ELISA Kit 小鼠碱性磷酸酶 48T
超级杂交液 ( 原位杂交 )10mL使用说明书ANG-4(Mouse Angiopoietin 4) ELISA Kit 小鼠血管生成素4 48T
BMPR- II (Mouse Bone morphogenetic protein receptor II ) ELISA Kit 小鼠骨成型蛋白受体Ⅱ 48T
MHC- III /H-2 III (Mouse major histocompatibility complex- III ) ELISA Kit 小鼠主要组织相容性复合体Ⅲ类 48T
E-Cad(Mouse E-Cadherin) ELISA Kit 小鼠E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白 48T
CD30(Mouse Cluster of differentiation 30) ELISA Kit 小鼠CD30分子 48T
MHC- II /H-2 II (Mouse major histocompatibility complex- II ) ELISA Kit 小鼠主要组织相容性复合体Ⅱ类 48T
sEPCR(Mouse soluble endothelial protein C receptor) ELISA Kit 小鼠可溶性血管内皮细胞蛋白C受体 48T
MECF(ouse eosinophil chemotactic factor) ELISA Kit 小鼠嗜酸粒细胞趋化因子 48T
Eotaxin 1/CCL11(Mouse Eotaxin 1) ELISA Kit 小鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白 48T
E-Selectin/CD62E(Mouse E-Selectin) ELISA kit 小鼠E选择素 48T
FAS/CD95(Mouse Factor-related Apoptosis) ELISA Kit 小鼠凋亡相关因子 48T
Mouse Slit2 ELISA Kit 小鼠Slit2
超级杂交液 ( 原位杂交 )10mL使用说明书
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5):异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)