2×Hieff™ PCR Plus Master Mix (No Dye)

2×Hieff™ PCR Plus Master Mix (No Dye)产品描述

  2×HieffTM PCR Plus Master Mix (No Dye)包含Taq Plus DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化实验的操作步骤，提高了高通量操作和实验结果的重现性。Mix中不含有溴酚蓝染料，其中的保护剂使得Mix 经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。PCR产物的3’端带A，可轻松克隆至T载体。
产品信息
 
组 分

产品编号/规格

10106ES03(1ml)

10106ES08(5×1ml)

2×HieffTM PCR Plus Master Mix

1ml

5×1ml

超纯水（PCR Grade）

1ml

5×1ml

运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 ºC保存。
2×Hieff™ PCR Plus Master Mix (No Dye)质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸外内酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时, DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测：50 μl体系中，以20 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的1 Kb条带。

应用实例

1.        反应体系配制（50μl）：
模板DNA§

optional

引物1（10 μM）

2 μl

引物2（10 μM）

2 μl

2×HieffTM PCR Plus Master Mix

25μl

ddH2O

up to 50μl

§ 针对不同模板的ZJ反应浓度有所不同，下表为50μl反应体系推荐模板使用量，仅供参考。

人基因组DNA

0.1～1 μg

大肠杆菌基因组DNA

10～100 ng

λDNA

0.5～5 ng

质粒DNA

0.1～10 ng

2.        PCR循环反应条件
94℃

5 min（预变性）

94℃

30 sec

35个循环

55℃*

30 sec         

72℃

30 sec/kb

72℃

7 min（彻底延伸）

* 退火温度需要根据引物的Tm值调整，一般设置成低于引物Tm值1-2℃即可。
2×Hieff™ PCR Plus Master Mix (No Dye)注意事项
1. 操作注意事项
由于Taq Plus DNA Polymerase室温下也有一定的反应活性，PCR反应体系配制需在冰上进行。体系混匀后快速置于PCR仪进行反应。这样可以减少反应准备阶段的非特异扩增，有助于得到更好的PCR结果。
2. 引物设计注意事项
2.1    引物3’端ZH一个碱基选择C或G；
2.2    引物3’端ZH8个碱基应避免出现连续错配；
2.3    引物3’端尽量避免发卡结构的出现；
2.4    引物Tm值控制在55℃-65℃之间；
2.5    引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
2.6    引物GC含量控制在40%-60%之间；
2.7    正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。
2×Hieff™ PCR Plus Master Mix (No Dye)yb1175    HPcF    人心包成纤维细胞    Human Pericardial Fibroblasts    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1176                    ATCC
yb1177        视觉细胞系统            ATCC
yb1178    HCEpiC    人角膜上皮细胞    Human Corneal Epithelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1179    HK    人角膜细胞    Human Keratocytes    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1180    HREC    人视网膜内皮细胞    Human Retinal Endothelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1181    HRPEpiC    人视网膜色素上皮细胞    Human Retinal Pigment Epithelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1182    HLEpiC    人晶状体上皮细胞    Human Lens Epithelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1183    HIPEpiC    人虹膜色素上皮细胞    Human Iris Pigment Epithelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1184    HConF    人结膜成纤维细胞    Human Conjunctival Fibroblasts    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1185    HNPCEpiC    人无色素睫装上皮细胞    Human Non-Pigment Ciliary Epithelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1186    HTMC    人小梁网细胞    Human Trabecular Meshwork Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1187    HOCF    人眼脉络膜成纤维细胞    Human Ocular Choroid Fibroblasts    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1188    HConEpiC    人结膜上皮细胞    Human Conjunctival Epithelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1189                    ATCC
yb1190        胎盘细胞系统            ATCC
yb1191    HVCEC    人绒毛膜毛细血管内皮细胞    Human Villus Capillary Endothelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1192    HAmEpiC    人羊膜上皮细胞    Human Amniotic Epithelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1193    HVT    人绒毛膜滋养层细胞    Human Villous Trophoblasts    1 x 10^6 cells/vial    ATCC
yb1194    HVMF    人绒毛间充质成纤维细胞    Human Villous Mesenchymal Fibroblasts    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1195        脂肪细胞系统            ATCC
yb1196    HAMEC    人脂肪微血管内皮细胞    Human Adipose Microvascular Endothelial Cells    1 x 10^6 cells/vial    ATCC
yb1197    HPA-v    人前脂肪细胞--内脏    Human Preadipocytes-visceral    1 x 10^6 cells/vial    ATCC
yb1198    HPA-s    人前脂肪细胞--皮下    Human Preadipocytes-subcutaneous    1 x 10^6 cells/vial    ATCC