iFluorTM 488 phalloidin iFluor™ 488标记鬼笔环肽（绿色）

iFluorTM 488 phalloidin iFluor™ 488标记鬼笔环肽（绿色）背景描述                                                                                                  

鬼笔环肽（Phalloidin）是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏（Amanita phalloides）的环状七肽毒素，以高亲和力（Kd= 20 nM）选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin，而不会与单体肌动蛋白G-actin结合，通常用来标记组织切片、细胞培养物或无细胞体系中的F-actin，从而对F-actin进行定性和定量分析。另外，鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维，无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞，按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略，染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此，鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白（Actin）抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小，直径约12-15Å，分子量＜2000 Daltons，未标记肌动蛋白（Actin）的许多生理特性都得以维持，比如，同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能发生反应；鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质；以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。

鬼笔环肽（Phalloidin）的结合阻止丝状肌动蛋白（微丝）的解离，稳定微丝结构，从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度（CC）降至＜1µg/mL，因此，可用作一种聚合促进剂。此外，鬼笔环肽还可YZF-actin的ATP水解活性。

本品为iFluorTM 488标记的鬼笔环肽，可发出高亮度、光稳定的绿色荧光，染色反应特异性强，对比性高，具有比Actin抗体更好的染色效果，适合用作F-actin的定性和定量检测。iFluorTM 488 鬼笔环肽染色与用于细胞分析的其他荧光染色完全兼容，包括荧光蛋白、Qdot® 纳米晶体和其他iFluorTM偶联物（包含iFluorTM偶联二抗）。另外，经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性，适用性广泛。

本品以1000×储存液形式（溶于DMSO）提供。

iFluorTM 488 phalloidin iFluor™ 488标记鬼笔环肽（绿色）产品性质

分子量（Molecular Weight）

～1900

ZD激发/发射波长（Ex/Em）

493/517nm

溶解性（Solubility）

溶于DMSO

结构式（Structure）


运输与保存方法

冰袋运输。收到货后-20℃避光干燥保存，1年有效。

注意事项

1）   鬼笔环肽具有毒性，需小心操作（对人的半数致死剂量LD50约2mg/kg）。

2）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 需要自备材料

1）   1×PBS缓冲液, pH 7.4, 细胞培养级别（货号：60145ES76）

2）   固定液4%多聚甲醛（不含甲醇）（溶于PBS缓冲液）（货号：36314ES60）

3）   透化液Triton X-100（溶于PBS缓冲液）

4）   BSA，标准级别（货号：36101ES25）

5）   DAPI染液（即用型）（货号：40728ES50）

iFluorTM 488 phalloidin iFluor™ 488标记鬼笔环肽（绿色）操作步骤

1.        1×工作液准备

吸取1µl 1000×iFluorTM 488标记鬼笔环肽（溶于DMSO）到1ml 含有1%BSA的PBS缓冲液中即可得到1×工作液。

注：1）使用前需将1000×DMSO iFluorTM 488鬼笔环肽储存液分装并于-20℃避光干燥保存。

2）不同的细胞染色情况不同，相应iFluorTM 488鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。

2.       染色步骤

1）   细胞培养过夜或更长，使其密度达到50-60%汇合度。

2）   吸掉培养液，37℃预热的1×PBS（pH 7.4）清洗细胞2次。

3）   使用溶于PBS的4%甲醛溶液进行细胞固定，室温固定10-30min。

注意：避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。

4）   室温条件下，用PBS清洗细胞2~3次，每次10min。

5）   （可选）：室温条件下，用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化处理3-5min，从而增加其通透性。

6）   室温条件下，用PBS清洗细胞2~3次，每次10min。

7）   取足够量新鲜配好的 iFluorTM 488标记鬼笔环肽工作液以覆盖住细胞，如：100µl/孔（96孔板），室温避光染色20-90min。

8）   用PBS清洗细胞3次，每次5min。

9）   （可选）：加入足量的即用型DAPI溶液对细胞核进行复染，如：100µl/孔（96孔板），室温3~5min。用PBS清洗细胞2次，每次5min。

10）于荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察，选择iFluorTM 488激发/发射滤片（Ex/Em=493/517nm）和/或DAPI激发/发射滤片（Ex/Em=364/454nm）。
iFluorTM 488 phalloidin iFluor™ 488标记鬼笔环肽（绿色）yb-1265    HeLa(宫颈癌细胞)
yb-1266    A549 [A-549](肺癌细胞)
yb-1267    MCF7(乳腺癌细胞)
yb-1268    Hep 3B2.1-7(肝癌细胞)
yb-1269    MDA-MB-231(乳腺癌细胞)
yb-1270    Hep G2(肝癌细胞)
yb-1271    HCT 116(结肠癌细胞)
yb-1272    22RV1(前列腺癌细胞)
yb-1273    HT-29(结肠癌细胞)
yb-1274    KG-1(白血病细胞)
yb-1275    LoVo(结肠癌细胞)
yb-1276    THP-1(单核细胞白血病)
yb-1277    SW620(结肠癌细胞)
yb-1278    SK-N-SH(神经母细胞瘤细胞)
yb-1279    SH-SY5Y(神经母细胞瘤细胞)
yb-1280    COLO 205(结肠癌细胞)
yb-1281    T/G HA-VSMC(人主动脉血管平滑肌细胞）
yb-1282    HUVEC（人脐静脉血管内皮细胞）
yb-1283    A10(大鼠主动脉血管平滑肌细胞)
yb-1284    3T3-L1(小鼠脂肪细胞)
yb-1285    A9(皮下结缔组织细胞)
yb-1286    WEHI 22.1(B淋巴细胞 )
yb-1287    NIH/3T3(胚胎成纤维细胞)
yb-1288    MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠原成骨细胞)
yb-1289    L6(大鼠成肌细胞 )
yb-1290    H9c2(2-1)(大鼠心肌细胞)
yb-1291    RSC96(大鼠雪旺细胞)
yb-1292    CHO/dhFr-(ZG仓鼠二氢叶酸还原酶缺陷细胞)
yb-1293    Lec1(卵巢细胞)
yb-1294    293T/17 [HEK 293T/17] (人胚肾细胞)
yb-1295    AAV-293( 胚肾细胞 )
yb-1296    hFOB 1.19(SV40 转染成骨细胞)
yb-1297    CCD-1095Sk(皮肤细胞 )
yb-1298    Hs 578Bst(乳腺细胞)
yb-1299    NK-92(人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞)
yb-1300    NK-92MI(人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞)
yb-1301    HMy2.CIR(人B 淋巴母细胞)
yb-1302    OK(负鼠(opossum)肾细胞)
yb-1303    FO(瘤细胞)
yb-1304    RAW 264.7(单核巨噬细胞白血病)
yb-1305    P19(畸胎癌细胞)