CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 细胞增殖与示踪检测试剂盒

CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 细胞增殖与示踪检测试剂盒产品描述

CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 是基于CFDA, SE对细胞进行示踪及增殖检测的试剂盒，由CFDA,SE粉末、溶剂及相关细胞染色缓冲液组成，该试剂盒主要工作原理为：CFDA, SE具有细胞膜渗透性，本身不具有荧光发光性。当通过被动运输穿透细胞膜进入活细胞后，可被胞浆内的酯酶催化生成羧基荧光素琥珀酰亚胺酯（carboxyfluorescein succinimidyl ester, CFSE），后者可发强烈的绿色荧光，不能穿透细胞膜，能完好的保留在胞内。CFSE还可自发性并不可逆地与细胞内的氨基结合从而偶联到细胞蛋白质上，同时过量且未被偶联的CFDA, SE通过被动扩散回到细胞外培养基内，被后续清洗步骤所清除。经CFDA, SE标记的非分裂细胞的荧光非常稳定，稳定标记的时间可达数月，因此非常适用于细胞群落分析。

CFDA, SE标记细胞的荧光非常均一，优于以前使用的其他细胞示踪荧光探针如PKH26，并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均一。在细胞分裂增殖过程中，CFSE 标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，荧光强度变为亲代细胞的一半，通过流式细胞仪（FL1通道）根据荧光强度的不同，可检测出未分裂细胞，分裂一次（1/2的荧光强度），二次（1/4的荧光强度），三次（1/8的荧光强度），以及更多分裂次数的细胞。CFSA，SE可检测分裂次数多达八次甚至更多。经CFDA, SE标记的细胞可用于体外和体内增殖研究，且具有不会使邻近细胞染色的功能。CFDA, SE最常用于淋巴细胞的增殖检测，也可用于成纤维细胞，自然杀伤细胞，造血祖细胞等其他细胞的增殖检测。

CFDA, SE标记细胞呈绿色荧光，Ex=494nm，Em=521nm，除了流式细胞仪检测细胞增殖外，还可用荧光酶标板定量活细胞数目，或者用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。

本品为CFDA，SE细胞增殖与示踪检测试剂盒，包含配制CFDA，SE储存液所需的溶剂和细胞标记用的染色缓冲液，简化了实验前期准备工作。另，CFDA,SE标记细胞一般15min即可完成，对于不同细胞，需要自行摸索ZJ标记时间。按照每个样本的标记体积为2ml计算。对应货号40714ES76和40714ES80的试剂盒可分别进行500次和1000次检测。

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

40714ES76（500T）

40714ES80（1000T）

40714-A

CFDA,SE 荧光探针

1管×2

1管×4

40714-B

CFDA,SE 溶剂

500µl×2

500µl×4

40714-C

细胞染色缓冲液（5×）

200ml×1

200ml×2

CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 细胞增殖与示踪检测试剂盒运输与保存

冰袋运输。-20℃干燥避光保存，有效期1年。

注意事项

1）     CFDA,SE易被水解，在水溶液中会很快变质。因此保存过程中粉末或者储存液都需干燥保存；而且使用过程中避免接触水。但在标记细胞的过程中和水接触是在许可范围内的。

2）   CFDA,SE溶剂在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，于20-25℃水浴温育片刻至全部

融解后方可使用。

3）   不同的细胞其细胞内酯酶活性不同，因此染色效果具有差异性。

4）   虽然本试剂盒已对CFDA,SE染色体系做了优化处理，但建议使用者根据自身的细胞类型，培养条件以及应用的不同来梯度摸索ZJ的工作浓度，以ZD浓度得到适宜的标记效率为准。

5）   荧光染料均存在淬灭问题，染色过程需尽量避光。

6）   为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 细胞增殖与示踪检测试剂盒操作方法

1.   CFDA,SE储存液（1000×）的配制

用1管500µl的DMSO溶解1管CFDA,SE，充分混匀即得到1000×的储存液。

【注意】该储存液在1个月内使用完毕，最长不超过2个月。剩余储存液请务必分装后于≤-20℃避光干燥保存，避免反复冻融，-70℃避光保存可适当延长保存周期。

2.   2×CFDA,SE工作液的配制

取适当体积的细胞染色缓冲液（5×），用无菌的去离子水进行5倍稀释，配制成1×细胞染色缓冲液，并利用该缓冲液对上述CFDA,SE（1000×）储存液进行500×稀释，如取2μl CFSE储存液加入到1ml 1×细胞染色缓冲液中，混匀后即可得到2×CFDA,SE染色工作液。【注意】：虽然本试剂盒已对CFDA,SE染色体系做了优化处理，但建议使用者根据自身的细胞类型，培养条件以及应用的不同来梯度摸索ZJ的工作浓度，以ZD工作浓度得到适宜的标记效率为准。

3.   操作步骤

1）     离心收集细胞，利用1ml 1×细胞染色缓冲液悬浮细胞于15ml离心管，并调整细胞浓度为1-5×106个/ml；

2）     把1ml CFDA,SE储存液(2×)加入到上述15ml离心管内，轻轻混匀。

3）     37℃孵育10min。【注意】：对于不同细胞，需要自行摸索ZJ标记时间。

4）     立即在15ml离心管内加入约10ml完全细胞培养液(含10% FBS)，室温颠倒数下混匀，以终止标记反应。

5）     室温离心去上清，再用5-10ml完全细胞培养液洗涤一次。

6）     再加入5-10ml完全细胞培养液，37℃孵育10min，以促进CFSE【酯酶催化CFDA,SE得到的荧光产物】在细胞内的驻留及未反应的CFDA,SE进入完全细胞培养液。离心去上清，完成ZH一次洗涤。

7）     此时标记好的细胞已可进行后续的体外增殖检测或者特定目的的细胞示踪。按照正常方法培养细胞，然后在合适的时间点用荧光显微镜或流式细胞仪【FL1通道】进行结果分析，呈绿色荧光。标记的细胞也可用于活体动物的移植，并用荧光进行示踪。

【注意】：若需要对细胞进行固定，请用醛类固定剂如3.7%多聚甲醛于室温固定15min；之后若还需要进行其他如抗体标记，请用冰丙酮透化处理细胞10min。
CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 细胞增殖与示踪检测试剂盒yb1161                    ATCC
yb1162        心脏细胞系统            ATCC
yb1163    HCMEC    人心脏微血管内皮细胞    Human Cardiac Microvascular Endothelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1164    HCAEC    人冠状动脉内皮细胞    Human Coronary Artery Endothelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1165    HAEC    人主动脉内皮细胞    Human Aortic Endothelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1166    HASMC    人主动脉平滑肌细胞    Human Aortic Smooth Muscle Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1167    HAF    人主动脉成纤维细胞    Human Aortic Fibroblasts    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1168    HCM    人心肌细胞    Human Cardiac Myocytes    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1169    HCM-a    人心肌细胞--成人    Human Cardiac Myocytes-adult    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1170    HCF    人心脏成纤维细胞    Human Cardiac Fibroblasts    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1171    HCF-av    人心脏成纤维细胞--成人心室    Human Cardiac Fibroblasts-adult ventrical    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1172    HCF-aa    人心脏成纤维细胞--成人心房    Human Cardiac Fibroblasts-adult atrial    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1173    HCF-a    人心脏成纤维细胞--成人    Human Cardiac Fibroblasts-adult     5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1174    HCF-fa    人心脏成纤维细胞--胎儿心房     Human Cardiac Fibroblasts-fetal atrial     6 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1175    HPcF    人心包成纤维细胞    Human Pericardial Fibroblasts    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1176                    ATCC
yb1177        视觉细胞系统            ATCC
yb1178    HCEpiC    人角膜上皮细胞    Human Corneal Epithelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1179    HK    人角膜细胞    Human Keratocytes    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1180    HREC    人视网膜内皮细胞    Human Retinal Endothelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1181    HRPEpiC    人视网膜色素上皮细胞    Human Retinal Pigment Epithelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1182    HLEpiC    人晶状体上皮细胞    Human Lens Epithelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1183    HIPEpiC    人虹膜色素上皮细胞    Human Iris Pigment Epithelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1184    HConF    人结膜成纤维细胞    Human Conjunctival Fibroblasts    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1185    HNPCEpiC    人无色素睫装上皮细胞    Human Non-Pigment Ciliary Epithelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1186    HTMC    人小梁网细胞    Human Trabecular Meshwork Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1187    HOCF    人眼脉络膜成纤维细胞    Human Ocular Choroid Fibroblasts    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1188    HConEpiC    人结膜上皮细胞    Human Conjunctival Epithelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1189                    ATCC
yb1190        胎盘细胞系统            ATCC
yb1191    HVCEC    人绒毛膜毛细血管内皮细胞    Human Villus Capillary Endothelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1192    HAmEpiC    人羊膜上皮细胞    Human Amniotic Epithelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1193    HVT    人绒毛膜滋养层细胞    Human Villous Trophoblasts    1 x 10^6 cells/vial    ATCC
yb1194    HVMF    人绒毛间充质成纤维细胞    Human Villous Mesenchymal Fibroblasts    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1195        脂肪细胞系统            ATCC
yb1196    HAMEC    人脂肪微血管内皮细胞    Human Adipose Microvascular Endothelial Cells    1 x 10^6 cells/vial    ATCC
yb1197    HPA-v    人前脂肪细胞--内脏    Human Preadipocytes-visceral    1 x 10^6 cells/vial    ATCC
yb1198    HPA-s    人前脂肪细胞--皮下    Human Preadipocytes-subcutaneous    1 x 10^6 cells/vial    ATCC
yb1199                    ATCC
yb1200        女性生殖细胞系统            ATCC
yb1201    HOMEC    人卵巢微血管内皮细胞    Human Ovarian Microvascular Endothelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1202    HOSEpiC    人卵巢表层上皮细胞    Human Ovarian Surface Epithelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1203    HOF    人卵巢成纤维细胞    Human Ovarian Fibroblasts    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1204    HMMEC     人乳腺微血管内皮细胞     Human Mammary Microvascular Endothelial Cells     5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1205    HMEpiC     人乳腺上皮细胞    Human Mammary Epithelial Cells    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1206    HMF     人乳腺成纤维细胞    Human Mammary Fibroblasts    5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1207                    ATCC
yb1208        间充质干细胞系统            ATCC
yb1209    HAMSC    人羊膜间充质基质细胞    Human Amniotic Mesenchymal Stromal Cells     5 x 10^5 cells/vial    ATCC
yb1210    HCMSC    人绒毛膜间充质基质细胞    Human Chorionic Mesenchymal Stromal Cells     5 x 10^5 cells/vial    ATCC