Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit AnnexinV-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒

Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit AnnexinV-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒产品描述

Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒是用荧光素APC标记的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-V（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外，本试剂盒中提供的7-AAD可用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。7-AAD是一种核酸染料，同PI有着相似的荧光特性，但其发射光谱较PI窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI的ZJ替代品，可与Annexin V联合使用。该染料不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可穿透晚期凋亡细胞或者坏死细胞并与其内的DNA结合。因此将Annexin V-APC与7-AAD联合使用时，7-AAD则被排除在活细胞（Annexin V-/7-AAD-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/7-AAD-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Annexin V-APC和7-AAD结合染色呈现双阳性（Annexin V+/7-AAD+）。

Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit AnnexinV-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒产品组分

编号

组分名称

产品编号/规格

40309ES20（20T）

40309ES50（50T）

40309ES60（100T）

40309-A

重组人Annexin V/APC*（rh Annexin V/APC）

100µl

250µl

500µl

40309-B

7-AAD Viability Staining Solution

100µl

250µl

500µl

40309-C

1×Binding buffer

10ml

25ml

50ml

*来源于大肠杆菌（E.coli），分子量为35.8 KDa，纯度＞98%（SDS-PAGE&HPLC）

运输和保存方法

冰袋运输。本试剂盒中所有组分均在4℃保存，勿冰冻。Annexin V-APC、7-AAD需避光保存。一年有效。

注意事项

1）     试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2）     7-AAD为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等；

3）     推荐使用悬浮培养细胞。若是贴壁细胞，建议使用不含EDTA的胰酶消化，如果消化不当，可能引起假阳性；若用细胞刮子则会造成细胞黏连成团而影响检测。可将胰酶消化后的细胞保存于含2% BSA的PBS中，防止进一步的损伤。

4）     本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不应低于1×105，不推荐用于组织样本检测。

5）     请勿固定样品，细胞固定后可能导致荧光的猝灭；

6）     因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡细胞处理的细胞作为阴性对照，并进行荧光补偿的调节。

7）     如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并低速离心（200×g）洗去血小板，然后用Annexin V结合缓冲液清洗细胞，以避免残留的EDTA会螯合Ca2+。

8）     Annexin V-APC和7-AAD是光敏物质，在操作时请注意避光。

9）     为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit AnnexinV-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒使用方法

1.1 样品染色

1.     悬浮细胞：300g，4℃离心5 min收集细胞。

贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化后，300g，4℃离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长，以防引起假阳性。

2.     用4℃预冷的PBS洗涤细胞2次，每次均需300g，4℃离心5 min。收集1-5×105细胞。

3.     加入500μl 的Binding buffer 悬浮细胞；

4.     加入5μl Annexin V-APC混匀后，加入5μl 7-AAD染液，混匀；

5.     室温、避光反应5-15min；样品在1小时内检测。

1.2 观察检测

A、流式细胞仪分析

1) 用流式细胞仪检测，Ex/Em=633/660nm 检测Annexin V-APC红色荧光建议使用FL4通道；Ex/Em=546/647nm检测7-AAD红色荧光建议使用FL3通道。

2) 荧光补偿调节：使用未经凋亡诱导处理的正常细胞，作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。

B、荧光显微镜观察

1）滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞；

2）对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；

a 将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，并设立阴性对照组；

b 用PBS洗涤细胞两次；

c 在500µl的Bingding buffer 中加入5µl Annexin V-APC，5µl 7-AAD染液混匀；

d 将上述溶液滴加于盖玻片表面，使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖；

e 室温避光孵育5min。

3）将盖玻片倒置于载玻片上，在荧光显微镜下用双色滤光片观察。于激发波长633nm，ZD发射波长660nm观察Annexin V-APC 红色荧光信号；激发波长546nm，发射波长647nm，观察7-AAD红色荧光信号。

Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit AnnexinV-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒yb-1191    CBRH-7919(肝癌细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1192    RH-35(肝癌细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1193    SHZ-88(乳腺癌细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1194    MLTC-1(睾丸间质细胞瘤细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1195    L6565(小鼠L6565白血病克隆细胞系).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1196    F9(畸胎瘤细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1197    LLC Lewis(肺癌细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1198    C127(乳腺肿瘤细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1199    MFC(胃癌细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1200    B16(黑色素瘤细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1201    B16(黑色素瘤细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1202    P815(肥大细胞瘤细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1203    S-180(腹水瘤细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1204    RM-1(前列腺癌细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1205    SAC-IIC3(腹水瘤细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1206    NG108-15 [ 108CC15 ](小鼠神经细胞瘤与大鼠神经胶质瘤之融合细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1207    SAC-IIB2(腹水瘤细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1208    Hepa 1-6(肝癌细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1209    P388D1(淋巴瘤细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1210    P3X63Ag8.653(瘤细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1211    YAC-1(淋巴瘤细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1212    P3X63Ag8(瘤细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1213    EL4. IL-2(淋巴瘤细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1214    SP2/0(瘤细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1215    EL4(淋巴瘤细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1216    P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1](瘤细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1217    PIEC(猪髋动脉内皮细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1218    CRFK(猫肾细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1219    EBTr (NBL-4)(牛胚气管细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1220    F81(猫肾细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
yb-1221    Mv.1.Lu(NBL-7)(貂肺上皮细胞).    品PaiATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周