Bradford Protein Quantification Kit Bradford蛋白浓度测定试剂盒产品描述
Bradford蛋白浓度测定法是目前常用的灵敏度较高的蛋白浓度测定方法之一。它是根据Bradford染液(考马斯亮蓝G-250染料)与蛋白结合,使染料的ZD吸收峰从A456变为A595,且测定的吸光值与蛋白浓度成正比关系的原理设计的。本法通过吸光值,推算蛋白浓度,实现了蛋白浓度测定的快速性和简便性。灵敏度高,比Lowry法大约高四倍,ZD蛋白检测量可达1μg。测定速度快、简单,仅需一种试剂即可,且不受大多数样品中化学试剂的影响。
我司提供二种规格的Bradford蛋白浓度检测试剂盒,比色皿法分别可做125次和625次。酶标法分别可做500次和2500次。
Bradford Protein Quantification Kit Bradford蛋白浓度测定试剂盒产品组分
编号
组分
产品编号/规格
20202ES76 (500T)
20202ES86 (2500T)
20202-A
Bradford蛋白染色液
125ml
5×125 ml
20202-B
蛋白标准品(BSA)
5×1ml(2mg/ml)
5×2ml(2mg/ml)
运输与保存方法
冰袋运输。
染色液4℃保存,蛋白标准品常温或4℃保存,有效期一年。
注意事项
1)Bradford染色液使用前,应充分混匀。同时,酶标仪需预热20min。
2)Bradford染色液需恢复到室温再使用,有利于提高检测的灵敏度。另,使用前需颠倒几次以充分混匀。
3)由于Bradford染液的颜色反应并不是同递增的蛋白浓度呈线性关系,因此每次试验都必须建立标准曲线。另外,为了得到更精确的结果,每个蛋白梯度和样品均需做复孔。
4)Bradford法测定蛋白浓度对大多数化学物质的兼容性比较好,比如对还原剂DTT的兼容性高达5mM。但会受到略高浓度的去垢剂影响,如,SDS需低于0.01%,Triton X-100低于0.05%,Tween 20/ 60/80低于0.015%等。对于含去垢剂的样品,建议使用BCA增强型蛋白定量检测试剂盒【货号:20201ES76】。
5)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Bradford Protein Quantification Kit Bradford蛋白浓度测定试剂盒操作方法
一、配制标准品
1. 配制BSA标准品体系
【注】:标准品稀释液为蛋白样品的溶解液,原则上蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS进行稀释。
BSA标准品体系配制可参考表一。
表一BSA标准品体系配制(微孔板检测,线性范围100-1500μg/ml)
Vial
稀释液体积(μl)
2mg/ml BSA体积(μl)
BSA终浓度(μg/ml)
A
0
100
2000
B
25
75
1500
C
50
50
1000
D
125
75
750
E
150
50
500
F
350
50
250
G
375
25
125
H
395
5
25
I
400
0
0=Blank
二、检测方法
A. 标准比色皿检测(线性范围:100-1500μg/ml)
1)各取20μl不同浓度标准品和待测样品加入到反应管中;
2)加入1ml Bradford染色液,混匀。室温孵育10min。【注】:样本室温孵育时间不可超过1h;
3)分光光度计上测定595nm处的吸光度,用装满水的比色皿对仪器校零。之后测定所有样本浓度。
4)根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即ZZ的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度μg/ml;Y-ZZ的OD595nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
B. 标准微孔板检测(线性范围:100-1500μg/ml)
1)各取5μl各浓度标准品和待测样品加入到微孔板中;
2)每孔加入250μl Bradford染色液,振荡30s充分混匀。盖上微孔板,室温孵育10min。【注】:样本室温孵育时间不可超过1h;
3)酶标仪上测定595nm处的吸光度。或者其他575~615nm波长范围内的吸光度,但是相对于595nm,吸光度会存在~10%的损失。
4)根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即ZZ的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度μg/ml;Y-ZZ的OD595nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
【注】:a)由于酶标板的光径比比色皿短,经酶标板检测得到的OD595nm会低于比色皿检测所得,因此可能降低本法的检测下限。要得到更高的OD595nm,可使用7-10μl标准品/待检样本,和250μl Bradford染色液来进行检测。b)如果使用与酶标仪相关的曲线拟合算法(curve fitting algorithm),那么四参数或者ZJ拟合曲线可能得到更为精确的结果,并不是单纯的线性拟合。若是手动标记各点浓度,点-点曲线出来的结果精确于线性拟合。若对结果准确性的要求不是非常严格,可使用线性拟合分析数据。
Bradford Protein Quantification Kit Bradford蛋白浓度测定试剂盒yb-3813R CDC34B泛素载体蛋白R2抗体 浓度1mg/ml
yb-6027R CADM3细胞粘附分子3抗体 浓度1mg/ml
yb-2386R CD47整合素相关蛋白CD47 浓度1mg/ml
yb-3743R phospho-CK8 (Ser23)磷酸化细胞角蛋白8抗体 浓度1mg/ml
yb-3758R Calbindin钙结合蛋白D28K抗体 浓度1mg/ml
yb-3738R phospho-Crkl(Tyr251)磷酸化接头蛋白CrkL抗体 浓度1mg/ml
yb-3739R phospho-Crkl (Tyr207)磷酸化接头蛋白CrkL抗体 浓度1mg/ml
yb-2791R CRHR1促肾上腺皮质释放激素受体1抗体 浓度1mg/ml
yb-3099R Phospho-Cofilin (Ser3)磷酸化丝切蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-2760R Cortactin皮层肌动蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-2792R CRHR2促肾上腺皮质释放激素受体2抗体 浓度1mg/ml
yb-3241R Phospho-c-Kit(Tyr703)磷酸化原癌基因c-kit抗体 浓度1mg/ml
yb-3242R Phospho-c-Kit(Tyr721)磷酸化原癌基因c-kit抗体 浓度1mg/ml
yb-2727R CRLF2胸腺基质淋巴细胞生成素受体抗体 浓度1mg/ml
yb-4083R phospho-c-Abl (Tyr134)磷酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体 浓度1mg/ml
yb-4084R phospho-c-Abl (Tyr253)磷酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体 浓度1mg/ml
yb-5149R CPI17 alpha蛋白磷酸激酶PKC/CPI-17抗体 浓度1mg/ml
yb-4085R phospho-c-Abl(Tyr272)磷酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体 浓度1mg/ml
yb-4086R phospho-c-Abl(Tyr276)磷酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体 浓度1mg/ml
yb-10088R CLPS胰辅脂酶抗体 浓度1mg/ml
yb-9681R C19orf4519号染色体开放阅读框45抗体 浓度1mg/ml
yb-9692R C20orf111过氧化氢诱导转录蛋白1抗体 浓度1mg/ml
yb-6202R CIKS核因子NFκB激活蛋白1抗体 浓度1mg/ml
yb-6987R C12orf23第12号染色体开放阅读框23抗体 浓度1mg/ml
yb-6990R γ-Cateninγ-连环素/连接蛋白γ抗体 浓度1mg/ml
yb-9767R C10orf410号染色体开放阅读框4抗体 浓度1mg/ml
yb-9768R C10orf4710号染色体开放阅读框47抗体 浓度1mg/ml