小鼠5-羟色胺Elisa Kit说明书

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小鼠5-羟色胺（5-ht）Elisa KitMouse 5-hydroxy tryptamine,5-ht ELISA Kit
小鼠5-羟色胺Elisa Kit说明书【实验用途】5-羟色胺,( 5-hydroxy tryptamine)一种吲哚衍生物。分子式C10H12N2O。5-羟色胺早是从血清中发现的，又名血清素，广泛存在于哺动物组织中，特别在大脑皮层质及神经突触内含量很高，它也是一种YZ性神经递质。在外周组织，5-羟色胺是一种强血管收缩剂和平滑肌收缩刺激剂。在体内，5-羟色胺可以经单胺氧化酶催化成5-羟色醛以及5-羟吲哚乙酸而随尿液排出体外。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体，经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

试剂配制:
1、小鼠5-羟色胺Elisa Kit说明书酶联板（Assay plate ）：一块（96孔或者48孔）。
2、标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3、样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
注意事项：
1加样：
①小鼠5-羟色胺Elisa Kit说明书实验样本过多时，可分批次操作，以减少实验时间延长造成的误差；
②加酶试剂后，用吸水纸吸干孔外试剂；
③作定量试验时，使用加样器加注试剂，并经常校正其准确性，此外，要做到一份样本一个移液头，防止交叉污染。
2.温育：
①如有两种温度，尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件；
②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察；
③96孔板周围孔与ZX孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”，因此尽量采用水浴；
3.洗板：
①手工洗板时，拍板时要垂直，避免交叉污染，用力不能过猛，防止抗原抗体复合物脱离；
②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅，若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出；
③为了洗涤效果好，实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法，在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次，或适当增加洗板的次数；
4.显色：
ELISA试剂盒中，如以四甲基联苯胺(TMB)为底物，则提供的底物为A和B两瓶应用液；如以邻苯二胺(OPD)为底物，则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂，要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光，但A、B液应尽量避免接触金属器械。
5.判定：
读取结果要在15-30 min内完成，定性测定用肉眼判读试验结果时，反应板应水平距离白色背景10-15 cm；定量测定时用酶标仪读取结果，酶标仪不应置于阳光或强光照射下，需先预热15-30 min再进行测试。
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现货供应　基乙醇胺-N-基转移酶(PNMT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

现货供应　基质金属蛋白酶7(MMP7)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

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现货供应　基质金属蛋白酶7(MMP7)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

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现货供应　基质金属蛋白酶8(MMP8)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

现货供应　基质金属蛋白酶8(MMP8)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

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操作步骤：
1）小鼠5-羟色胺Elisa Kit说明书运用前，将所有试剂充沛混匀。不要使液体发生很多的泡沫，防止加样时参加很多的气泡，发生加样上的差错。
2）依据待测样品数量加上规范品的数量决议所需的板条数。每个规范品和空白孔主张做复孔。每个样品依据自个的数量来定，能运用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后参加50ul于反响孔内。
3）参加稀释好后的规范品50ul于反响孔、参加待测样品50ul于反响孔内。当即参加50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，悄悄振动混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，每孔加满洗刷液，振动30秒，甩去洗刷液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。假如用洗板机洗刷，洗刷次数添加一次。
5）每孔参加80ul的亲和链酶素-HRP，悄悄振动混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，每孔加满洗刷液，振动30秒，甩去洗刷液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。假如用洗板机洗刷，洗刷次数添加一次。
7）每孔参加底物A、B各50ul，悄悄振动混匀，37℃温育10分钟。防止光照。
8）取出酶标板，敏捷参加50ul停止液，参加停止液后应当即测定成果。
9）在450nm波利益测定各孔的OD值。