问:常用的DNA 浓度及纯度检测方法有哪些?
非酶多糖清除剂 (RNA 专用 )10mL品Pai称答:回收得到的DNA段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。琼脂糖凝胶电泳通过对比定量的Marker 来定量浓度;紫外分光检测OD260/280 比值,OD260/280 比值在1.7-1.9 之间说明所得 DNA 纯度较好,如果洗脱时不使用溶液Eluent而使用去离子水,比值会偏低,因为pH 值和离子存在会影响光吸收值,但不表示纯度低。
问:长片段回收时应注意哪些问题?
答:非酶多糖清除剂 (RNA 专用 )10mL品Pai当DNA 段长度较长(5 kb 以上)时,回收效率会有所下降,这是DNA 切胶回收时的常见现象。此时建议按以下方法解决问题:
1 适当增加待回收DNA 样品的点样量;
2 由于长段DNA 不易从树脂上洗脱下来,建议洗脱两次,可以提高洗脱效率;
3 减少操作过程中对长段DNA 的物理损伤,如混合振荡操作不要过于剧烈,切胶时不要将DNA 长时间暴露在紫外等下。
非酶多糖清除剂 (RNA 专用 )10mL品Pai的详细介绍:
DNA提取流程图:
公司非酶多糖清除剂 (RNA 专用 )10mL品Pai的RNA/DNA提取目录有下面10个系列,5000余种产品:点击了解更RNA纯化。
1、RNA纯化系列产品
2、DNA纯化系列产品
3、电泳及回收系列产品
4、探针标记及检测系列产品
5、核酸扩增系列产品
6、克隆表达系列产品
7、基因组研究系列产品
8、蛋白质研究系列产品
9、细胞生物学研究系列产品
10、即用型溶液、质粒库、菌种库等等
实验步骤:
(1)非酶多糖清除剂 (RNA 专用 )10mL品Pai实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
注意事项:
● 非酶多糖清除剂 (RNA 专用 )10mL品Pai溶液PE *次使用前请按瓶上标签加入4 倍体积的无水乙醇,即15 ml 溶液PE 中加入60 ml 无水乙醇,20 ml 溶液PE 中加入80 ml 无水乙醇,使用后立即盖紧盖子。
● 本产品对电泳使用的Agarose 种类没有严格限制,可以使用普通Agarose 。为了保证回收DNA 的质量和DNA 回收效率,希望使用高纯度的Agarose ,但没有必要一定要使用低熔点的Agarose 等。
● 电泳时请使用新鲜配制的TAE 电泳缓冲液,以免影响电泳及回收效果。
● 请适当延长电泳时间,在条带分离清晰后进行切胶回收,以免回收到多余杂带。
● 为提高DNA 回收收率,切胶时应尽量除去多余的胶块。
● 本试剂盒纯化柱的DNA 吸附能力强。但如果DNA 浓度小,或DNA 初始量少,回收率将会偏低。
● 溶液Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA段可直接用于各种酶促反应等,不会影响后续试验。
● 为了保证回收效率,请不要使用未调整pH 值的超纯水洗脱目的段。
● 请严格按照操作步骤操作。
尼氏染色液(亚甲蓝法),3*50ml 进口/原装
尼氏染色液(甲基紫法),2*50ml 进口/原装
尼氏染色液(焦油紫法),2*100ml 进口/原装
焦油紫染色液(0.06%),100ml 进口/原装
焦油紫染色液(0.1%),100ml 进口/原装
焦油紫染色液(0.5%),50ml 进口/原装
磷脂铁苏木素(FeH)染色液,3*100ml 进口/原装
神经HRP示踪显色液(TMB法),50T 进口/原装
神经HRP示踪显色液(DAB法),50T 进口/原装
核仁组成区嗜银蛋白染色液(AgNOR Stain),2*50ml 进口/原装
苏丹Ⅳ染色液,3*50ml 进口/原装
苏丹Ⅲ酒精饱和溶液,100ml 进口/原装
苏丹IV酒精饱和溶液,100ml 进口/原装
苏丹Ⅳ染色液-A液,100ml 进口/原装
苏丹Ⅲ染色液,3*50ml 进口/原装
非酶多糖清除剂 (RNA 专用 )10mL品PaiWright'sstain规格:BS
Wortmannin规格:<98%,美国进口,PI3K/AKT通路的YZ剂
Woolfat规格:BR
Wogonoside规格:HPLC≥98%,标准品
Wogonin规格:HPLC≥98%,标准品
WilforlideA规格:HPLC≥98%,标准品
Wilforine规格:HPLC≥98%,标准品
Wedelolactone规格:HPLC≥98%,标准品
Water-solubletetrazoliuM-8;GLT008规格:BR,<97%
Water规格:HPLCgrade