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细胞名称 水貂肺上皮细胞;Mv.1.Lu(NBL-7)说明书
形态特性 上皮细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 银貂细胞。 用于鼠科动物及野生肉瘤病毒的焦点形成检测。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 优质胎牛血清,10%;0.1mM NEAA
传代方法 消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
传代情况 PN5
冻存条件 完全培养基+8%DMSO
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
使用权限 A类
水貂肺上皮细胞;Mv.1.Lu(NBL-7)说明书操作流程:
1.1 主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100%,计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线
水貂肺上皮细胞;Mv.1.Lu(NBL-7)说明书注意事项:
1. 接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。
2.用75%的酒精消毒(建议配置75%的酒精的水是灭菌过的)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。
水貂肺上皮细胞;Mv.1.Lu(NBL-7)说明书美国菌种保藏ZX, 又称美国模式菌种收集ZX(ATCC),是位于马里兰洲洛克菲勒的一家私营的,非赢利性组织。目前它可以提供各种动植物细胞、标准品、菌株达两万多种。ATCC成立于1925年,是世界上zui大的生物资源ZX,由美国14家生化、医学类行业协会组成的理事会负责管理,是一家性、非盈利生物标准品资源ZX。ATCC向发布其获取、鉴定、保存及开发的生物标准品,推动科学研究的验证、应用及进步 ATCC可以提供以下类别生物标准品:细胞株(3000多种);菌株(15000多种);动植物病毒株(2500多种)以及重组物质等。
七叶苷培养基试验培养基,用于细菌七叶苷利用试验(SN标准)
1%吐温80-玉米琼脂培养基 1%Tween80-Corn Meat Agar Mediun 用于白色念珠菌产芽管试验。
0.5%葡萄糖肉汤培养基 0.5% Dextrose Broth Medium 250克 环氧乙烷消毒和电离辐射消毒过程检测指示菌(枯草杆菌黑色变种芽孢及短小杆菌芽孢)培养(GB标准)
PLET琼脂基础250g/瓶用于炭疽杆菌的分离鉴别,需加入多粘菌素B、溶菌酶、乙酸亚胺incubationmediaPLET琼脂基础250g/
0.0每支添加于HB4086中
Combinednitrogen-fixingbacteriamedium
布氏肉汤 Brucella Broth 250 用于弯曲杆菌增菌肉汤和布氏琼脂制备(SN标准)
细菌保存培养基250g/瓶用于菌种培养与保存,可制备菌种保存斜面(pH7.3)incubationmedia细菌保存培养基250g/瓶用于菌种培养与保存,可制备菌种保存斜面(pH7.3)
Baird-ParkerAgarBase
AgarmediumF
尿道病原菌快速双面培养管(显色培养基用) 个 incubation media 尿道病原菌快速双面培养管(显色培养基用) 个
Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 2x5支 试剂A和试剂B各一支添加于225ml(026080)中配成FB1增菌液。
克氏双糖铁琼脂KliglerIronAgar用于细菌复合生化试验(葡萄糖,乳糖)
Melamine
CM-R092大鼠关节软骨细胞完全培养基100mL
ALPI Others Human 人 Alkaline Phosphatase / ALPI 人细胞裂解液 (阳性对照)
小鼠软骨细胞完全培养基 100mL
P3X63Ag8.653小鼠瘤细胞 Mouse myeloma cell line P3X63Ag8.653 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS
IL12A & IL12B Protein Human 重组人 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白
USMC(大鼠血管平滑肌细胞) 5×106cells/瓶×2 HAVSMC, 人主动脉平滑肌细胞
CM-R092大鼠关节软骨细胞完全培养基100mL
ALPI Others Human 人 Alkaline Phosphatase / ALPI 人细胞裂解液 (阳性对照)
小鼠软骨细胞完全培养基 100mL
P3X63Ag8.653小鼠瘤细胞 Mouse myeloma cell line P3X63Ag8.653 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS
IL12A & IL12B Protein Human 重组人 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白
USMC(大鼠血管平滑肌细胞) 5×106cells/瓶×2 HAVSMC, 人主动脉平滑肌细胞
水貂肺上皮细胞;Mv.1.Lu(NBL-7)说明书人结膜纤维原细胞(HConF)(5×105 )
615小鼠状肺腺癌瘤株;P615
CM-M027小鼠食管上皮细胞完全培养基100mL
小鼠树突状细胞肉瘤细胞;DCS 小鼠上皮细胞完全培养基 100mL
小鼠皮层神经胶质细胞(EGFP标记) Mouse
WFIKKN2 Others Human 人 WFIKKN2 / GASP-1 人细胞裂解液 (阳性对照)