技术服务内容:
实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳,以软件分析电泳条带的灰度值(IOD值),通过与内参基因的灰度值比较,判断目的mRNA的相对表达量。
产品名称 | 猪蓝耳病毒(欧洲株)核酸检测试剂盒供应商 |
规格 | 48T/盒 |
编号 | FS-R2421 |
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,ZH通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括JD定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的JD定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
RN-h, 大鼠海马趾神经元 正常人细胞,Hs 1.Tes细胞 MDBK (NBL-1)(牛肾细胞)羧甲司坦;S-羧甲基-L-半胱氨酸Carbocistein;S-Carboxymethyl-L-cysteine质量规格:>98%,BR
人结直肠腺癌细胞;COLO 205S-苄基-L-半胱氨酸S-Benzyl-L-cysteine质量规格:>98%,BR
5E Others Mouse 小鼠 5E / CD73 人细胞裂解液 (阳性对照) L-谷氨酸盐酸盐L-Glutamic acid hydrochloride质量规格:>99%,BR
小鼠胚胎成纤维细胞;BALB/C 3T3N'-硝基-L-精氨酸(L-NNA)Nω-Nitro-L-arginine质量规格:>98%,BR
ORM2 Others Human 人 ORM2 人细胞裂解液 (阳性对照) Nα-苯甲酰-L-精氨酸Nalpha-Benzoyl-L-arginine质量规格:>98%,BR
THP-1人单核白血病细胞 Human甲磺酸依普罗沙坦;依普沙坦Eprosartan mesylate质量规格:>98%,血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂
CNAP2 Others Mouse 小鼠 CNAP2 / CASPR2 人细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸苯甲脒Benzamidine HCl质量规格:>98%,BR
人前列腺成纤维细胞RNAHPrF miRNA5 μg氯化铬;三氯化铬Chromium(III) chloride质量规格:>98%
BLNK Others Human 人 BLNK 人细胞裂解液 (阳性对照) 肌酸一水Creatine, monohydrate质量规格:>98%,BR
PANC-1 人癌细胞右旋糖苷/葡聚糖10Dextran-10质量规格:M.W:10000
LL-PK1细胞,猪肾细胞 人卵巢癌细胞,A2780细胞 人表皮角质细胞-裂解物HEK-a LDL-天冬酰胺,一水DL-Asparagine monohydrate质量规格:>99%
非洲绿猴肾细胞;VERODL-乳酸(USP)DL-Lactic acid质量规格:88~92%,USP
IGFBP4 Others Mouse 小鼠 IGFBP4 人细胞裂解液 (阳性对照) 柠檬酸三铵Ammonium citrate, tribasic质量规格:> 98%,AR
牛陀螺状细胞;BT铬天青S(Ind Grade)CAS, Chrome azurol S质量规格:Ind Grade
MSR1 Others Rat 大鼠 MSR1 / SCARA1 人细胞裂解液 (阳性对照) 5'-三磷酸胞苷二钠盐Cytidine-5'-triphosphate (CTP), disodium salt质量规格:>98%,分子生物学级
猪蓝耳病毒(欧洲株)核酸检测试剂盒供应商MDBK(牛肾细胞) 5×106cells/瓶×2草酸钴(>99%,BR)质量规格:>99%,BRCobalt (II) oxalate
Promocell C-22170 Myocyte GrowthMedium KIT, 心肌细胞生长培养基套装 500ml刀豆素A(> 95%,BR)质量规格:> 95%,BRConcanamycin A
kasumi-1, 人白血病细胞株普伐他丁钠(标准品)质量规格:HPLC>98%,标准品Pravastatin Sodium
ART4 Others Mouse 小鼠 Art4 / CD297 人细胞裂解液 (阳性对照) 普伐他丁钠质量规格:>98%Pravastatin Sodium
大鼠内脏脂肪细胞完全培养基 100mL泼尼松龙质量规格:>98.5%,USP/BPPrednisolone
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以ZD引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。