产品名称:线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒25管/24样
规格:25管/24样
测试方法:紫外分光光度法
测定意义复合体Ⅰ(EC 1.6.5. 3)又称NADH-CoQ 还原酶或NADH脱氢酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,是线粒体内膜中zui大的蛋白复合物。该酶催化一对电子从NADH传递给CoQ,同时可使O2还原生成O2.-,是呼吸电子传递链上产生O2.-的主要部位。测定该酶活性,不仅可以反映呼吸电子传递链(ETC)状态,而且可以反映活性氧(ROS)生成状态。
线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒25管/24样主要特点为:
(1)应用广泛
由于各种各样的无机物和有机物在紫外可见区都有吸收,因此均可借此法加以测定。到目前为止,几乎化学元素周期表上的所有元素(除少数放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。
(2)灵敏度高
由于相应学科的发展,使新的有机显色剂的合成和研究取得可喜的进展,从而对元素测定的灵敏度大大提高了一步。特别是由于多元络合物和各种表面活性剂的应用研究,使许多元素的摩尔吸光系数由原来的几万提高到几十万。相对于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和准确度*公认是比较高的。不但在实际工作中光度法被广泛采用,在标准参考物质的研制中,它更受重视,很多光度分析法已制定成为标准方法。
(3)选择性好
线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH-辅酶Q还原酶测试盒25管/24样目前已有些元素只要利用控制适当的显色条件就可直接进行光度法测定,如钴、铀、镍、铜、银、铁等元素的测定,已有比较满意的方法了。
(4)准确度高
对于一般的分光光度法来说,其浓度测量的相对误差在1-3%范围内,如采用示差分光度法测量,则误差往往可减少到千分之几。咨询!
(5)适用浓度范围广
可从常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(经预富集后)。
(6)分析成本低、操作简便、快速.
注意事项:
1.检测前,检查各种仪器,打开酶标仪,稳定20分钟左右。
2.检测样本要澄清,不能含杂物,否则会直接影响结果。
3.实验开始前要将试剂盒取出,室温放置30-40分钟,使各种试剂都恢复到室温,以使检测结果更为稳定。
4.尽量做双标准实验,这样可以保证数据的准确性。
5.底物具有毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,要避免接触。
6.实验中,要使底物避光保存,酶标板均可拆卸,多余的部分应密封好,低温保存。
操作流程:
1. 植物吲哚乙酸氧化酶(IAAO)ELISA试剂盒进口国产从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
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