常用PCR引物100uL保存产品及特点:
易错 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校对功能的特性,在一定条件下(如不同的 dNTP 浓度、Mg 浓度和 MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法,则可从构建的突变库选出所需突变体。易错 PCR 和常规 PCR 的比较如下:本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错 PCR 而开发,本产品具有下列特点:
1. 即开即用,十分简单方便,尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化,突变率稳定,突变没有趋向性。易错 PCR 的突变率为 0.66% (±0.13%),详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单,但如果在 PCR 引物中设计位点,则可使产物克隆到表达载体,也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4. 可用于连续易错 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易错 PCR 的产物用作下一次易错 PCR 的模板即可,使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增 1kb 以下的产物,对于 1kb 以上的产物,建议分段扩增。
常用PCR引物100uL保存变性温度与时间:
模板变性温度是决定 PCR 反应中双链 DNA 解链的温度,达不到变 性温度就不会产生单链 DNA 模板,PCR 也就不会启动。变性温度低则变性不完全, DNA 双链会很快复性,因而减少产量。变性温度太高,又会影响酶的活性。一般情况 下可设为 94℃ 20~30 秒,高温时间应尽量缩短,以保持耐热 DNA 聚合酶的活力, zui高变性温度不宜超过 95℃。 退火温度与时间:退火温度决定 PCR 特异性与产量。温度高特异性强,但过高则引物 不能与模板牢固结合.
常用PCR引物100uL保存DNA 扩增效率下降;
温度低产量高,但过低可造成引物与模板 错配,非特异性产物增加。合适的退火温度一般在 45~68℃之间。设置特定反应的zui 适退火温度,可根据引物的(G+C)%含量进行推测,一般实验中退火温度比扩增引 物的熔解温度 Tm 低 5℃,退火时间一般为 30~60 秒,足以使引物与模板之间完全结 合,长时间退火没有必要。
常用PCR引物100uL保存使用方法:
1. 以 30 uL 的标准 PCR 反应体系为例,如果反应体系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的 PCR 管中,加入下列成分:易错 PCR Mix, 10× 3 uL 易错 PCR 专用 dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自备 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自备,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 补水到 30 uL
2. 按已经优化的 PCR 条件进行一定循环数的 PCR(循环数与突变率的关系见下表),然后取 5 uL 电泳检查。如果没有优化的 PCR 条件,一般可以先尝试下面的 PCR 条件: PCR 前变性 94℃ 3 分钟易错 PCR 94℃ 1 分钟 45℃ 1 分钟 循环 30 次(见注) 72℃ 1 分钟注:易错 PCR 一般不需要热启动,也不需要在 PCR 结束后做延伸处理。
Prostaglandin F2α methyl ester (5 mg) 9。alpha。,11。alpha。,15S-trihydroxy-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid, methyl ester; PGF2α methyl ester; Prostaglandin F2α methyl ester
Dibutyryl-cGMP (sodium salt) (50 mg) Dibutyryl Guanosine 3’,5’-cyclic monophosphate; N-(1-oxobutyl)-cyclic 3’,5’-(hydrogen phosphate) 2’-butanoate guanosine, monosodium salt
七水流亚铁(1KG) Ferrous Sulfate, 7H2O, CAS 7782-63-0; ≥99.5%
Metyrapone (1 g) 2-
7(Z),11(Z)-Nonacosadiene (5 mg) (7Z,11Z)-nonacosadiene; 7(Z),11(Z)-Nonacosadiene
Biotinyl-Ala-Ser-Thr-DL-Asp-Fluoromethylketone; Biotinyl-ASTD-Fluoromethylketone Biotinyl-ASTD-FMK
FFA Assay Enzyme Mixture (1 ea) FFA Assay Enzyme Mixture
生物素标记三甲基化组蛋白H3K27多肽 Biotinylated Trimethyl Histone H3K27 Peptide (200 ul)
Tamoxifen (5 g) 2-[4-[(1Z)-1,2-diphenyl-1-buten-1-yl]phenoxy]-N,N-dimethyl-ethanamine; Tamoxifen
4-fluoro-α-Pyrrolidinopentiophenone (hydrochloride) (10 mg) 4-fluoro-α-2-(1-pyrrolidinyl)-Valerophenone|4-fluoro-α-PVP; 1-(4-fluorophenyl)-2-(1-pyrrolidinyl)-1-pentanone, monohydrochloride
Fluorouracil (25 g) 5-fluoro-2,4(1H,3H)-pyrimidinedione; NSC 19893|Ro 2-9757|U-8953; Fluorouracil
PtdIns--3,5)-P2 -1,2-dioctanoyl) -sodium salt) (5 mg) DOPI-3,5-P2|Phosphatidylinositol-3,5-bisphosphate C-8, PtdIns--3,5)-P2 -1,2-dioctanoyl) -sodium salt), 1-(1,2-dioctanoylphosphatidyl)inositol-3,5-bisphosphate, trisodium salt
Cell-Based Assay Calcein AM (1,000X) (1 ea) Cell-Based Assay Calcein AM (1,000X)
(R)-ketemine (xy7nochloride) (10 mg) (2R)-2-(2-chloropxenyl)-2-(metxylamino)-cyclohexanone, monoxy7nochloride
Amplite Red HRP底物 Amplite Red HRP Substrate
CAY10581 (10 mg) (±)3,4-dixy7no-3-xy7noxy-2,2-dimetxyl-4-[(pxenylmetxyl)amino]-2H-naphtho[2,3-b]pyran-5,10-dione; CAY10581
Palmitoyl N-Isopropylamide (100 mg) N-isopropyl-hexadecanamide; PIA; Palmitoyl N-Isopropylamide
N1-(4-chloropxenyl)-6-metxyl-N5-[3-(9H-purin-6-yl)-2-pyridinyl]- 1,5-Isoinoneolinediamine B-Raf Inhibitor 1
Bufferedglycerol-SodiumChlorideSolution
盐胱氨酸增菌液(SC) Selenite Cystine Broth 用于沙门氏菌选择性增菌培养(GB、SN标准)
月示胨 Proteose peptone 250 培养基原材料,为营养要求高的细菌生长提供营养
Bolton肉汤基础250g/瓶用于弯曲菌选择性增菌,每培养基中添加070ubationmediaBolton肉汤基础250g/瓶用于弯曲菌选择性增菌,每培养基中添加0701
BDSMedium
大肠杆菌显色培养基CRM002l大肠杆菌显色培养基用于大肠杆菌的快速检测和计数
L-Trptophan L-色氨酸 Japan 25g incubation media L-Trptophan L-色氨酸 Japan 25g
灵芝(红芝,赤芝) 降低糖蜜废水 支/瓶
盐胱酸增菌液(SC)20支/包用于沙门氏菌选择性增菌培养
青霉素酶制备培养基
常用PCR引物100uL保存BLAgarMedium
42℃生长培养基 42℃growth Medium 用于副溶血性弧菌42℃生长试验(SN标准)
无菌猪血清 Sterile Defidrinated Pig Blood 100毫升 BR
改良GAM琼脂基础250g/瓶用于厌氧菌培养,每培养基中添加22可选择性添加222各ncubationmedia改良GAM琼脂基础250g/瓶用于厌氧菌培养,每培养基中添加22可选择性添加222各1支
MI培养基 1000ml 用于滤膜法计数饮用水中大肠埃希氏菌和大肠菌群