GTP 溶液,2.5mM2mL图片使用方法:
1. 以 30 uL 的标准 PCR 反应体系为例,如果反应体系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的 PCR 管中,加入下列成分:易错 PCR Mix, 10× 3 uL 易错 PCR 专用 dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自备 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自备,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 补水到 30 uL
2. 按已经优化的 PCR 条件进行一定循环数的 PCR(循环数与突变率的关系见下表),然后取 5 uL 电泳检查。如果没有优化的 PCR 条件,一般可以先尝试下面的 PCR 条件: PCR 前变性 94℃ 3 分钟易错 PCR 94℃ 1 分钟 45℃ 1 分钟 循环 30 次(见注) 72℃ 1 分钟注:易错 PCR 一般不需要热启动,也不需要在 PCR 结束后做延伸处理。
GTP 溶液,2.5mM2mL图片产品及特点:
易错 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校对功能的特性,在一定条件下(如不同的 dNTP 浓度、Mg 浓度和 MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法,则可从构建的突变库选出所需突变体。易错 PCR 和常规 PCR 的比较如下:本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错 PCR 而开发,本产品具有下列特点:
1. 即开即用,十分简单方便,尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化,突变率稳定,突变没有趋向性。易错 PCR 的突变率为 0.66% (±0.13%),详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单,但如果在 PCR 引物中设计位点,则可使产物克隆到表达载体,也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4. 可用于连续易错 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易错 PCR 的产物用作下一次易错 PCR 的模板即可,使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增 1kb 以下的产物,对于 1kb 以上的产物,建议分段扩增。
GTP 溶液,2.5mM2mL图片DNA 扩增效率下降;
温度低产量高,但过低可造成引物与模板 错配,非特异性产物增加。合适的退火温度一般在 45~68℃之间。设置特定反应的zui 适退火温度,可根据引物的(G+C)%含量进行推测,一般实验中退火温度比扩增引 物的熔解温度 Tm 低 5℃,退火时间一般为 30~60 秒,足以使引物与模板之间完全结 合,长时间退火没有必要。
GTP 溶液,2.5mM2mL图片详细说明书:
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8-iso Prostaglandin F1β (50 mg) 9。beta。,11。alpha。,15S-trihydroxy-(8。beta。)-prost-13E-en-1-oic acid; 8-epi-9β-PGF1α|8-iso PGF1β; 8-iso Prostaglandin F1β
3-CAF (1 mg) naphthalen-2-yl 1-(2-fluorophenyl)-1H-indazole-3-carboxylate
杜氏磷酸缓冲液(500ML) Dulbecco’s PBS, Without calcium and magnesium. Sterile filtered.
HA-100 (hydrochloride) (5 mg) 5-(1-piperazinylsulfonyl)-isoquinoline, dihydrochloride; C-1; HA-100 (hydrochloride)
Trichostatin A (1 mg) 7-[4-(dimethylamino)phenyl]-N-hydroxy-4,6R-dimethyl-7-oxo-2E,4E-heptadienamide; TSA; Trichostatin A
Q-IE(OMe)-TD(OMe)-OPh; Quinolyl-Ile-Glu(OMe)-Thr-Asp(OMe)-OPh Caspase-8 Inhibitor, Q-IETD-OPh
HDAC8 Developer (1 ea) HDAC8 Developer
二甲基化组蛋白H3K4多肽 Dimethyl Histone H3K4 Peptide (200 ul)
thio-p-Toluamide (1 g) 4-methyl-benzenecarbothioamide; 4-thioamide; thio-p-Toluamide
1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-O-ethyl-3-PC (chloride) (100 mg) 1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-O-ethyl-3-Phosphocholine|1,2-EDPPC|DPePC; 4-ethoxy-N,N,N-trimethyl-10-oxo-7R-[(1-oxohexadecyl)oxy]-4-oxide-3,5,9-trioxa-4-phosphapentacosan-1-aminium, monochloride
PB-22 N-(4-hydroxypentyl) metabolite (5 mg) quinolin-8-yl 1-(4-hydroxypentyl)-1H-indole-3-carboxylate; PB-22 N-(4-hydroxypentyl) metabolite
CAY10493 (5 g) 4-[1-(4-tert-Butoxycarbonyl-benzyl)-1H-indol-4-yl]-Piperezine-1-carboxylic acid tert-butyl ester, CAY10493, 4-[1-(4-tert-butoxycarbonyl-benzyl)-1H-indol-4-yl]-piperezine-1-carboxylic acid tert-butyl ester
enponete Buffer (1 ea) wo7ium enponete; enponete Buffer
Nε- CML; N6-(carboxymetxyl)-L-lysine
蓝色活细胞荧光探针Cytol Blue Cytol Blue
10-nitnooleate-d17 (500 ug) 10-nitnooleic Acid-d17|10-nitno-9-trans-Octadecenoic Acid-d17; 10-nitno-9E-octadecenoic-11,11,12,12,13,13,14,14,15,15,16,16,17,17,18,18,18-d17 acid
13-Docosenamide (5 g) 13Z-docosenamide; Armoslip E|Erucamide|cis-13-Docosenamide; 13-Docosenamide
2-(4-Benzylpxenoxy)-N-(1-benzylpiperidin-4-yl)acetamide AdipoRon
NitrateSalinePeptoneWaterMedium
维生素B12测定用培养基 100(g) incubation media 维生素B12测定用培养基 100(g)
胰蛋白胨水肉汤 Tryptone Broth 250克 靛基质试验
产毒培养基250用于青霉、曲霉的产毒培养incubationmedia产毒培养基250用于青霉、曲霉的产毒培养
H-顶层培养基 250g 用于鼠伤寒沙门氏杆菌回复突变试验(Ames试验)
改良MSRV培养基(定量)250g用于沙门氏菌的分离培养
气单胞菌培养基基础 250g 用于气单胞菌分离培养
XLT4琼脂 XLT4 Agar 250 用于食品中致病菌,特别是沙门氏菌分离培养(Merck方法)
小牛浸液肉汤250g/瓶用于苛养菌的培养incubationmedia小牛浸液肉汤250g/瓶用于苛养菌的培养
RoseBengalMedium
GTP 溶液,2.5mM2mL图片弗拉特氏菌培养基250g用于弗拉特氏菌平板计数
5L incubation media 5L
类球红细菌(球形红杆菌) 支/瓶
EC肉汤(含小倒管)20支/包用于粪大肠菌群、大肠杆菌的测定
MannitolSaltAgarMedium
GTP 溶液,2.5mM2mL图片变性温度与时间:
模板变性温度是决定 PCR 反应中双链 DNA 解链的温度,达不到变 性温度就不会产生单链 DNA 模板,PCR 也就不会启动。变性温度低则变性不完全, DNA 双链会很快复性,因而减少产量。变性温度太高,又会影响酶的活性。一般情况 下可设为 94℃ 20~30 秒,高温时间应尽量缩短,以保持耐热 DNA 聚合酶的活力, zui高变性温度不宜超过 95℃。 退火温度与时间:退火温度决定 PCR 特异性与产量。温度高特异性强,但过高则引物 不能与模板牢固结合