两管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次保存使用方法:
1. 以 30 uL 的标准 PCR 反应体系为例,如果反应体系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的 PCR 管中,加入下列成分:易错 PCR Mix, 10× 3 uL 易错 PCR 专用 dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自备 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自备,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 补水到 30 uL
2. 按已经优化的 PCR 条件进行一定循环数的 PCR(循环数与突变率的关系见下表),然后取 5 uL 电泳检查。如果没有优化的 PCR 条件,一般可以先尝试下面的 PCR 条件: PCR 前变性 94℃ 3 分钟易错 PCR 94℃ 1 分钟 45℃ 1 分钟 循环 30 次(见注) 72℃ 1 分钟注:易错 PCR 一般不需要热启动,也不需要在 PCR 结束后做延伸处理。
两管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次保存产品及特点:
易错 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校对功能的特性,在一定条件下(如不同的 dNTP 浓度、Mg 浓度和 MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法,则可从构建的突变库选出所需突变体。易错 PCR 和常规 PCR 的比较如下:本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错 PCR 而开发,本产品具有下列特点:
1. 即开即用,十分简单方便,尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化,突变率稳定,突变没有趋向性。易错 PCR 的突变率为 0.66% (±0.13%),详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单,但如果在 PCR 引物中设计位点,则可使产物克隆到表达载体,也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4. 可用于连续易错 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易错 PCR 的产物用作下一次易错 PCR 的模板即可,使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增 1kb 以下的产物,对于 1kb 以上的产物,建议分段扩增。
两管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次保存DNA 扩增效率下降;
温度低产量高,但过低可造成引物与模板 错配,非特异性产物增加。合适的退火温度一般在 45~68℃之间。设置特定反应的zui 适退火温度,可根据引物的(G+C)%含量进行推测,一般实验中退火温度比扩增引 物的熔解温度 Tm 低 5℃,退火时间一般为 30~60 秒,足以使引物与模板之间完全结 合,长时间退火没有必要。
两管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次保存详细说明书:
Prostaglandin F1α (1 mg) 9。alpha。,11。alpha。,15S-trihydroxy-prost-13E-en-1-oic acid; PGF1α; Prostaglandin F1α
SMAD3 Inhibitor, SIS3 (500 ug) 1-(3,4-dihydro-6,7-dimethoxy-2(1H)-isoinoneolinyl)-3-(1-methyl-2-phenyl-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3-yl)-2-propen-1-one
特美汀(5GM) Timentin, 15:1 Ticarcillin Disodium Salt / potewwium Clavulanate Mixture
Vardenafil (hydrochloride hydrate) (100 mg) 2-[2-ethoxy-5-[(4-ethyl-1-piperazinyl)sulfonyl]phenyl]-5-methyl-7-propyl-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-4(1H)-one, monohydrochloride trihydrate; Vardenafil (hydrochloride hydrate)
8-hydroxy Guanosine (1 mg) 8-hydroxy-guanosine; 8-hydroxy Guanosine
JAK/STAT Signaling Inhibitor Panel, PathwayReady PathwayReady JAK/STAT Signaling Inhibitor Panel
Methyltransferase Assay AdoHcy Positive Control (1 ea) MT Assay AdoHcy Positive Control; Methyltransferase Assay AdoHcy Positive Control
生物素标记磷酸化组蛋白H3S10多肽 Biotinylated Phospho Histone Ser 10 Peptide (100 ul)
N-3-oxo-tetradec-7(Z)-enoyl-L-Homoserine lactone (1 mg) 3-oxo-N-[(3S)-tetrahydro-2-oxo-3-furanyl]-7-tetradecenamide; 3-oxo-C14:1-Δ7cis-(L)-HSL; N-3-oxo-tetradec-7(Z)-enoyl-L-Homoserine lactone
Ac-VDVAD-AFC (10 mg) Caspase-2 Substrate (Fluorogenic)|N-Acetyl-Val-Asp-Val-Ala-Asp-7-amido-4-Trifluoromethylcoumarin; N-
JWH 203 N-(5-hydroxypentyl) metabolite-d5 (100 ug) 2-(2-chlorophenyl)-1-(1-(5-hydroxypentyl)-1H-indol-3-yl)ethan-1-one-2,4,5,6,7-d5; JWH 203 N-(5-hydroxypentyl) metabolite-d5
17-phenyl trinor Prostaglandin F2α ethyl amide (5 mg) .,15S-trihydroxy-17-phenyl-18,19,20-trinor-prosta-5Z,13E-dien-1-amide; 17-phenyl trinor PGF2α ethyl amide|15(S)-Bimatoprost|Bimatoprost; 17-phenyl trinor Prostaglandin F2α ethyl amide
Mouse Monoclonal Anti-Rabbit IgG (500 dtn) Mouse Monoclonal Anti-Rabbit IgG
MTSSL (50 mg) 2,5-dixy7no-2,2,5,5-tetrametxyl-3-[[(metxylsulfonyl)thio]metxyl]-1H-pyrrol-1-yloxy
Z-IETD-ProRed 620 Z-IETD-ProRed 620
Ketorolac (1 g) 5-benzoyl-2,3-dixy7no-1H-pyrrolizine-1-carboxylic acid; Acular LS |Acular PF |RS 37619|Sprix ; Ketorolac
Heptadecanoyl Ethanolamide (100 mg) N-(2-xy7noxyetxyl)-heptadecanamide; Heptadecanoyl Ethanolamide
(2E)-3-(6-Bromo-2-pyridinyl)-2-cyano-N-[(1S)-1-pxenylethy]-2-propenamide EZSolution WP1066
PALCAM琼脂250g用于单增李氏菌选择性分离(FDA标准)
四环素检定琼脂 Tetracyline Examination Agar 用于四环素残留的微生物学检定(SN标准)
聚山梨酯80培养基(真菌) Tween80 Medium(Fungi) 250克 油剂的真菌无菌试验
MiddleBrook7H基础250g/瓶用于分枝杆菌的分离培养,每90ml培养基中添加0.5ml甘油和2ncubationmediaMiddleBrook7H基础250g/瓶用于分枝杆菌的分离培养,每90ml培养基中添加0.5
AeromonasMediumBase(Ryan)
50161 BR 10㎏ incubation media 50161 BR 10㎏
粉红寄生菌 模式菌株。抗原特性:Type 3。质量控制菌株 支/瓶
我妻氏血琼脂平板(9cm)用于神奈川现象试验
麦芽浸膏琼脂 200g 用于霉菌和酵母菌的分离培养和计数
两管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次保存Salicin
Agar for fungi acc.to KIMMIG( base) modified 真菌改性琼脂(氯化) 1.05414.0500 MERCK默克 incubation media Agar for fungi acc.to KIMMIG( base) modified 真菌改性琼脂(氯化) 1.05414.0500 MERCK默克
山梨醇麦康凯琼脂基础(SMAC) 250g 用于致病性大肠杆菌(包括O157:H7)的分离培养(SN/T0973-2000和SN/T 1827-2006
两管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次保存变性温度与时间:
模板变性温度是决定 PCR 反应中双链 DNA 解链的温度,达不到变 性温度就不会产生单链 DNA 模板,PCR 也就不会启动。变性温度低则变性不完全, DNA 双链会很快复性,因而减少产量。变性温度太高,又会影响酶的活性。一般情况 下可设为 94℃ 20~30 秒,高温时间应尽量缩短,以保持耐热 DNA 聚合酶的活力, zui高变性温度不宜超过 95℃。 退火温度与时间:退火温度决定 PCR 特异性与产量。温度高特异性强,但过高则引物 不能与模板牢固结合