超级杂交液 ( 原位杂交 )10mL说明书详细说明书:
超级杂交液 ( 原位杂交 )10mL说明书使用方法:
一、交换反应 1. 实验前需自备的试剂:7 M 醋酸铵、100%乙醇、70%乙醇等
2. 在微量离心管中制备下列反应液.
3. 37℃反应 30 分钟。
4. 70℃加热 5~10 分钟使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀时使其终浓度达 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷无水乙醇,-20℃放置 30~60 分钟。
7. 离心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。 注:通过第 5~8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP,如要 完全将其除去时,乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用苯酚抽 提除去蛋白质时,请在第 8 步之后进行。
超级杂交液 ( 原位杂交 )10mL说明书确定洗膜温度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此条件下的洗膜温度比 Tm 低 5-12℃,一般情况下可以在 55℃进行洗膜。Oligo 探针可以室温洗膜。 四、预杂交步骤 预杂交就是用不含探针的超级杂交液跟印迹膜进行孵育,其目的是用所含 的非特异性 DNA 分子(鲑精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物将印 迹膜上会非特异地吸附探针分子的位点封闭,否则这些位点会吸附标记的探 针,造成高背景。
1. 将结合了靶分子的硝酸纤维素印迹膜或尼龙印迹膜浸泡于自备的 6× SSC 溶液中,使其充分湿润。
2. 将湿润的印迹膜置于一塑料杂交袋中(塑料袋预先封口,再剪掉一角, 留一个小口),按每平方厘米印迹膜加 0.2 mL 超级杂交液的比例沿小口 加入超级杂交液,然后用塑料封口机将口封牢。 3. 将此塑料袋浸没入温度设定在杂交温度的恒温水浴中或杂交炉中,保 温 1-2 小时,延长到 12-16 小时亦可。注意保温过程中塑料袋应在不停 的摇动状态中,使超级杂交液与印迹膜充分接触。
超级杂交液 ( 原位杂交 )10mL说明书步骤:
1. 如果标记的探针是双链核酸,则需经变性处理。具体操作是:根据探针浓 度和杂交所需探针的量计算出所需的探针体积,取出所需体积的探针到一 干净的硅化的塑料离心管中,加入等体积的本产品,吹打混匀后室温放置 5 分钟变性后,将探针样品放入冰浴中冷却,加入 0.05 倍体积的自备的 1 M 的 Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等体积的自备的 0.4 M 的 HCl 溶液。 将探针样品保存在冰浴中直至需要。如果是单链 DNA 或 RNA 探针,则 不需变性,直接使用。
2. 将单链探针或变性后的双链探针加入到完成了预杂交的杂交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探针后用热封机封口)。探针的加入量视探针标记效率 而定,一般要求终浓度不能低于 1-2 ng/mL。如果检测基因组中的单拷 贝基因,探针的加入量应加大,而对于检测克隆的基因片段,则探针的量 可减少。如果是放射性探针,应将此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 杂交袋发生遗漏、污染工作环境。
3. 在选定的杂交温度下继续保温,时间一般为 6-12 小时。 六、洗膜步骤。注意在下面的所有操作过程中,一定不要使印迹。
大鼠乙酰胆碱(Ach)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人信号传导子及转录激活子4(STAT4)免疫试剂盒 human STAT4 ELISA Kit
单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒 紫外分光光度法 50管/48样
Ratmacrophageinflammatoryprotein3α,MIP-3αELISA试剂盒大鼠巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA试剂盒规格:96T/48T
HumanHeatShockFactor1,HSF1ELISA试剂盒人热休克因子1(HSF-1)ELISA试剂盒规格:96T/48T
HumanleukocyteantigenE,HLA-EELISAKit人类白细胞抗原E(HLA-E)ELISA试剂盒规格:96T/48T
大鼠血管紧张素Ⅰ转化酶(ACE)ELISA试剂盒 ,英文名: ACE ELISA Kit
人血吸虫(schistosoma)ELISA检测试剂盒humanschistosomaELISAKit 96T/48T
大鼠CD63分子(CD63)免疫试剂盒 Rat Cluster of Differentiation 63,CD63 ELISA Kit
CLIAKitforsEPCRELISAKit大鼠可溶性血管内皮细胞蛋白C受体规格:48T/96T
生物素化学底物复合试剂盒5次
ELISAKitKLK11人激肽释放酶11规格:48T/96T
小鼠酶(CAT)ELISA 试剂盒 48T/96T 试剂盒 组装/原装
Rat immunoglobulin E (IgE) ELISA Kit 大鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒
humanNoradrenaline,NAELISAKit 人去甲肾上腺素(NA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
HumanAnti-phosphatidylserineantibody,APSAELISA试剂盒人抗磷脂酰丝氨酸抗体(APSA)ELISA试剂盒规格:96T/48T
植物细胞可溶性总核蛋白粗提制备试剂盒20次
HumantypeⅡcollagenhelicalpeptide,HELIX-ⅡELISAKit人Ⅱ型胶原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)ELISA试剂盒规格:96T/48T
8(S)-HETrE (100 ug) 8S-xy7noxy-9E,11Z,14Z-eicosatrienoic acid; 8(S)-HETrE
Carprofen (1 g) Carprodyl|NSC 297935; 6-chloro-α-metxyl-9H-carbazole-2-acetic acid
iFluor 514-标记链霉亲和素偶联物 1 mg/ml iFluor 514-streptavidin conjugate 1 mg/ml
Prostaglandin E1 etxyl ester (10 mg) 11α,15S-dixy7noxy-9-oxo-prost-13E-en-1-oic acid, etxyl ester; Alprostadil etxyl ester|PGE1 etxyl ester; Prostaglandin E1 etxyl ester
13(Z)-Docosenoic Acid (100 mg) 13Z-docosenoic acid; Erucic Acid; 13(Z)-Docosenoic Acid
α-Carboxybenzylpenicillin diwo7ium salt Carbenicillin diwo7ium
GMAP (16-41), amideLeu-Gln-Ser-Glu-Asp-Lys-Ala-Ile-Arg-Thr-Ile-Met-Glu-Phe-Leu-Ala-Phe-Leu-His-Leu-Lys-Glu-Ala-Gly-Ala-Leu-NH2
α-CGRP (23-37) (human)Val-Lys-Asn-Asn-Phe-Val-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2
[Lys8]-Conopressin SCys-Ile-Ile-Arg-Asn-Cys-Pro-Lys-Gly-NH2(Disulfide bridge:Cys1-Cys6)
Biotin-IkB Inhibitor, amideBiotin-Asp-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Leu-Asp-Ser-Met-Lys-Asp-NH2
OVA(323-339)Ile-Ser-Gln-Ala-Val-His-Ala-Ala-His-Ala-Glu-Ile-Asn-Glu-Ala-Gly-Arg
超级杂交液 ( 原位杂交 )10mL说明书二异丙胺DiisopropylamineCP250ml
CA1111-5g酸性品红3244-88-05g0
I5500-10MGInsulin 牛胰岛素11070-73-810mg
Tissue RNA Kit100T
Lanthanum Acetate25g