预混型丙烯酰胺 - 甲叉双丙烯干粉 (19:1)100g保存后续处理:
1. 染色观察:将凝胶一面的玻璃板揭开,直接用仍然附着在另一玻璃板上的 凝胶进行各种染色,包括银染(固定、漂洗、显影和定影等步骤)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液)、天泽基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下观察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置,切胶后进行胶回收处理。
3. Northern 杂交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置,切胶后电转移到带正电的尼龙膜上,然后进行杂交处理。
4. 放射自显影:如果 miRNA 样品电泳前经过同位素标记,则将凝胶一面的 玻璃板揭开,用滤纸将附着在另一玻璃板上的凝胶吸附过来,然后包上保 鲜膜,真空抽干,然后使胶跟 X 光片向对置进行放射自显影。
预混型丙烯酰胺 - 甲叉双丙烯干粉 (19:1)100g保存产品及特点:
尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Urea PAGE)是目前分离 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是单独 配制各种溶液十分繁琐,为此天泽基因开发了本产品。它具有下列特点: 1. 一站式,含有电泳所需要的所有试剂,即开即用,十分方便,免去了 实验人员称取有毒物品。 2. 灵活,可以根据需要配制各种浓度的 Urea-PAGE,以便对长度各异 的 RNA 进行电泳。 3. 电泳后可直接用于 UV 观察、银染、胶回收、Northern 杂交和放射自 显影等。 4. 使用新型缓冲液,可以防止甘油的干扰。
预混型丙烯酰胺 - 甲叉双丙烯干粉 (19:1)100g保存使用方法:
一、准备工作
1. 用固相 RNase 清除剂清洁工作的台面和器皿(详见该产品的使用手册)。
2. 配制 1 X 电泳缓冲液 将适量的 10X 电泳缓冲液用 RNase-free 水稀释 10 倍,得到 1X 电泳缓 冲液待用。
3. 配制 10%过硫酸铵溶液 精确称取约 100 mg 过硫酸铵到一干净的 1.5 mL 离心管中,按每 1 mg 过硫酸铵加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,摇晃致溶, 立即使用。注意:放置时间不要超过一周。
二、配制凝胶
1. 估计所需要的凝胶溶液的体积,一般配制一块 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的胶需要 15 mL 凝胶溶液,配制一块 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的胶 需要 120 mL 凝胶溶液。
2. 新鲜的 40%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液的配制:在装有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入约 130 mL 自备的去离子水,然后将全部甲叉双丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液冲洗出来以避免粉末有 毒粉末飘出。甲叉双丙烯酰胺溶解度低,不会溶解在这少量溶液中)。充 分摇晃混匀后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是这样可以在下步留出足够空间加尿素。
3. 根据所需要的凝胶溶液的体积,在一的干净的三角瓶中按下表加入各成分
4. 搅拌并加热到 40-50℃左右,直到尿素完全溶解。
5. 冷却到室温后,将三角瓶接上真空系统抽真空处理 10-15 分钟以充分去 除溶液中的氧气(氧气会降低聚合反应效率)。但如果实验条件有限,此 步也可以省略。
6. 边摇晃溶液变加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%过硫酸铵。注意:即 使选择其他工作浓度的 Acrylamide/Bis,TEMED 和 10%过硫酸铵的用 量也不需要随之改变。但如果配置的凝胶溶液的体积变化,TEMED 和 10%过硫酸铵的用量也要按比例改变。
7. 再充分摇晃约 30 秒后迅速灌胶,然后插入样品梳。
8. 室温放置 30-60 分钟使胶凝固。
9. 将凝胶板放置在电泳装置上后,在上下层分别加入适当量的 1X 电泳缓冲 液。如果不马上使用,需要有湿纸将上样孔端盖住以防凝胶过度干燥。
10. 拔出梳子后用加样枪吸取电泳缓冲液,充分将每个加样空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和气泡吹打出来。
猴肾细胞;Vero IgCD4
FST Others Mouse 小鼠 Follistatin / FST 人细胞裂解液 (阳性对照)
HPB-ALL(悬浮) T细胞白血病
769-P人肾细胞腺癌细胞 769-P human renal cell carcinoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS
VEGFC Protein Rat 重组大鼠 VEGFC / VEGF-C 蛋白 (aa 108-223, Fc 标签)
大鼠海马趾星形胶质细胞(RAh)(5×105) ACHN, 人肾细胞腺癌细胞 Human
IL6ST Others Cynomolgus 食蟹猴 IL6ST / gp130 人细胞裂解液 (阳性对照)
人脑瘤细胞;SF763
CM-H122人神经星形胶质细胞完全培养基100mL
(+)9811细胞,人胃癌细胞 人骨肉瘤细胞,SP20细胞 人胚胎眼巩膜成纤维细胞;HFSF
DU 145(人前列腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2
CA12 Others Mouse 小鼠 Ca12 / Car12 人细胞裂解液 (阳性对照)
人脑瘤细胞;SF763
IL6ST Others Cynomolgus 食蟹猴 IL6ST / gp130 人细胞裂解液 (阳性对照)
CM-H122人神经星形胶质细胞完全培养基100mL
(+)9811细胞,人胃癌细胞 人骨肉瘤细胞,SP20细胞 人胚胎眼巩膜成纤维细胞;HFSF
DU 145(人前列腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2
CA12 Others Mouse 小鼠 Ca12 / Car12 人细胞裂解液 (阳性对照)
sIgA ELISA Kit 大鼠分泌型免疫球蛋白AMulti-class antibodies规格: 48T
Anti-WRCH-1 WRCH1抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh G6PD/Glucose 6 Phosphate Dehydrogenase 葡萄糖-6磷酸脱氢酶抗体 规格 0.1ml
AcSDKP ELISA Kit 大鼠N-乙酰基-丝酰-天门冬酰-赖酰-脯酸 96T
NUP160 英文名称: 核孔蛋白NUP160抗体 0.2ml
Arginyl tRNA synthetase 英文名称: 精酰tRNA合成酶抗体 0.2ml
Anti-WRCH-1 WRCH1抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml
Goat Anti-human IgG/Bio 生物素标记的羊抗人IgG 0.1ml
GALC/Galactosylceramidase 英文名称: 半乳糖神经酰胺酶抗体 0.2ml
Bcl-2抗体 Anti-Bcl-2 0.1ml
Anti-NGX6 /FITC 荧光素标记鼻咽癌细胞相关基因6抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PPP2R3 蛋白质磷酸酶2A亚基3抗体 规格 0.2ml
Anti-WNT9A/WNT14/FITC 荧光素标记信号通路Wnt9a抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
预混型丙烯酰胺 - 甲叉双丙烯干粉 (19:1)100g保存Cytochrome-C 小鼠细胞色素CMulti-class antibodies规格: 48T
Anti-Fibulin 1 “衰老关键蛋白”抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Rabbit IgM/AP 碱性磷酸酶(AP)标记的小鼠抗兔IgM 规格 0.1ml
AhR(Human aryl hydrocarbon receptor) ELISA Kit 人芳香烃受体 96T
SIX2 英文名称: 转录因子同源框蛋白SIX2抗体 0.2ml
CD163L1 英文名称: CD163蛋白样1抗体 0.1ml
Anti-Fibulin 1 “衰老关键蛋白”抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml