PAGE不连续凝胶电泳缓冲液（5×）100ml实验方法

PAGE不连续凝胶电泳缓冲液(5×)100ml实验方法使用注意事项
1．微量试剂取用前请离心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
4．本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
PAGE不连续凝胶电泳缓冲液(5×)100ml实验方法操作方法
1．悬浮细胞离心（2000rpm离心5min）收集；贴壁细胞用胰酶消化收集用PBS洗涤细胞二次（2000rpm离心5min）收集1~5×105细胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混匀；室温、避光、反应5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer悬浮细胞；
4．请在1 hour内，进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。
A．荧光显微镜观察
1．滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞；
2．对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；
（1）将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，并设立阴性对照组；
（2）用PBS洗涤细胞两次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混匀；
（4）将上述溶液滴加于盖玻片表面，使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖；
（5）避光、室温反应5 min。
3．将盖玻片倒置于载玻片上，于荧光显微镜下观察激发波长546nm，发射波长647 nm，7-AAD荧光信号呈红色。
B．流式细胞仪分析
用流式细胞仪检测，激发波长Ex=546 nm; 发射波长Em=647 nm。
7-AAD红色荧光建议使用FL3通道检测。
PAGE不连续凝胶电泳缓冲液(5×)100ml实验方法实验步骤
贴壁细胞需用0.25%的胰酶消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加2％的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的胰酶消化时，注意必须彻底清除EDTA：在标记前用1×PBS或1×bindingbuffer洗涤，清除EDTA，以免残余的EDTA与Ca2＋螯合，影响Annexin V的结合。
（1）用去离子水将10×Binding Buffer稀释成1×Binding Buffer；
（2）细胞收集。悬浮细胞收集：离心5分钟；贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化收集后（注：胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC的结合），于室温2000rpm离心5～10分钟，收集细胞；
（3）细胞洗涤：用预冷1×PBS（4℃）重悬细胞一次，2000rpm离心5～10分钟，洗涤细胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 悬浮细胞；
（5）Annexin V-FITC标记：加入5μL的Annexin V-FITC混匀后，避光，室温孵育15分钟；
（6）PI标记：上机前5分钟再加入5μL的PI染色。
（7）上机前，补加200μL的1×Binding Buffer。
CCL8 Protein Human 重组人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 标签)

人膀胱平滑肌细胞完全培养基 100mL

IL1R2 Others Mouse 小鼠 IL1R2 / CD121b 人细胞裂解液 (阳性对照)

Hepa 1-6细胞，小鼠肝癌细胞 PC-12(肾上腺嗜铬细胞瘤细胞) EB病毒转化的人B淋巴细胞;KMY0923

人胚肺成纤维细胞;MRC-5

SK-Hep-1(人肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2 狗 IL17RD 人细胞裂解液 (阳性对照)
CM-H135人脉络膜微血管细胞完全培养基100mL

DPYS Others Human 人 DPYS / Dihydropyrimidinase 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)

人内皮细胞HSEC

非洲绿猴肾细胞(SV40转化);COS-1 [COS1] 转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞，293细胞 QGY-7703(肝癌细胞)

人肺癌细胞;A549 [A-549]

FAS Others Mouse 小鼠 FAS / TNFRSF6 / CD95 人细胞裂解液 (阳性对照)
CD8A Others Ferret 雪貂 CD8A / CD8 alpha chain 人细胞裂解液 (阳性对照)

人肾系膜细胞总RNAHRMC tRNA

NCI-H520 人肺鳞癌细胞

CL-0361HPAC(人腺泡上皮癌)5×106cells/瓶×2

mEPC, 小鼠内皮祖细胞-

人胚肾二倍体细胞;HEK-2 人直肠平滑肌细胞完全培养基 100mL
大鼠凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

人丝氨酸蛋白酶HTRA1(HTRA1)免疫试剂盒 Human Serine protease HTRA1,HTRA1 ELISA kit

单宁含量试剂盒 可见分光光度法 50管/48样

RatVascularEndothelialcellGrowthFactorD,VEGF-DELISA试剂盒大鼠血管内皮细胞生长因子D(VEGF-D)ELISA试剂盒规格：96T/48T

HumanLymeIgGELISA试剂盒人莱姆IgG(Lyme-IgG)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Humanpara-aminobenzoicacid,PABAELISAKit人对氨基苯甲酸(PABA)ELISA试剂盒规格：96T/48T
山羊雌二醇(E2)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Rat inducible nitric oxide synthase (iNOS) ELISA Kit 大鼠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA试剂盒

Humananti-cytomegalovirusIgGantibody,anti-CMVIgGELISAKit 人抗巨细胞病毒抗体IgG(anti-CMVIgG)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

humanguanylatenucleotidebindingprotein4,Gbp4ELISA试剂盒人鸟苷酸结合蛋白4(Gbp4)ELISA试剂盒规格：96T/48T

组织脯氨酸羟化酶(prolilhydroxylase)活性比色法定量检测试剂盒20次

Humanmaturationpromotingfactor,MPFELISAKit人成熟促进因子(MPF)ELISA试剂盒规格：96T/48T
PAGE不连续凝胶电泳缓冲液(5×)100ml实验方法大鼠乙醛脱氢酶(ALDH)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

大鼠乙醇脱氢酶(ADH)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

大鼠胰高血糖素样肽1(Glp-1)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

大鼠胰高血糖素（Glu）ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装