Tris缓冲盐溶液（10×TBS,pH7.5）500ml实验方法

Tris缓冲盐溶液(10×TBS,pH7.5)500ml实验方法使用注意事项
1．微量试剂取用前请离心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
4．本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
Tris缓冲盐溶液(10×TBS,pH7.5)500ml实验方法操作方法
1．悬浮细胞离心（2000rpm离心5min）收集；贴壁细胞用胰酶消化收集用PBS洗涤细胞二次（2000rpm离心5min）收集1~5×105细胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混匀；室温、避光、反应5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer悬浮细胞；
4．请在1 hour内，进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。
A．荧光显微镜观察
1．滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞；
2．对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；
（1）将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，并设立阴性对照组；
（2）用PBS洗涤细胞两次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混匀；
（4）将上述溶液滴加于盖玻片表面，使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖；
（5）避光、室温反应5 min。
3．将盖玻片倒置于载玻片上，于荧光显微镜下观察激发波长546nm，发射波长647 nm，7-AAD荧光信号呈红色。
B．流式细胞仪分析
用流式细胞仪检测，激发波长Ex=546 nm; 发射波长Em=647 nm。
7-AAD红色荧光建议使用FL3通道检测。
Tris缓冲盐溶液(10×TBS,pH7.5)500ml实验方法实验步骤
贴壁细胞需用0.25%的胰酶消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加2％的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的胰酶消化时，注意必须彻底清除EDTA：在标记前用1×PBS或1×bindingbuffer洗涤，清除EDTA，以免残余的EDTA与Ca2＋螯合，影响Annexin V的结合。
（1）用去离子水将10×Binding Buffer稀释成1×Binding Buffer；
（2）细胞收集。悬浮细胞收集：离心5分钟；贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化收集后（注：胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC的结合），于室温2000rpm离心5～10分钟，收集细胞；
（3）细胞洗涤：用预冷1×PBS（4℃）重悬细胞一次，2000rpm离心5～10分钟，洗涤细胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 悬浮细胞；
（5）Annexin V-FITC标记：加入5μL的Annexin V-FITC混匀后，避光，室温孵育15分钟；
（6）PI标记：上机前5分钟再加入5μL的PI染色。
（7）上机前，补加200μL的1×Binding Buffer。
IL8 Protein Canine 重组狗 IL-8 / CXCL8 蛋白

人肠微血管内皮细胞完全培养基 100mL

TMED1 Others Human 人 TMED1 人细胞裂解液 (阳性对照)

AMS2细胞，人干细胞因子单克隆抗体细胞株 阪崎肠杆菌 大耳山羊皮肤细胞;LDG-3

小鼠T淋巴细胞;Cl.Ly1+2-/9

OP9(小鼠基质细胞) 5×106cells/瓶×2 人 CD8B / P37 / LEU2 人细胞裂解液 (阳性对照)
人肾上腺皮质腺癌细胞;NCI-H295R

EFNB3 Others Rat 大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 人细胞裂解液 (阳性对照)

人直结肠平滑肌细胞完全培养基 100mL

L1210细胞，小鼠白血病细胞 多形拟杆菌 大额牛肾细胞;BFR-K1

CCL24 Protein Human 重组人 CCL24 / Eotaxin-2 / MPIF-2 蛋白 (His 标签)

P3X63Ag8(小鼠瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 SARS冠状病毒 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
CD4 Others Human 人 CD4 / LEU3 (aa 1-208) 人细胞裂解液 (阳性对照)

人少突胶质前体细胞-悬浮生长裂解物HOPC-os L

CAM191 EBV-转化人淋巴细胞

CL-0094HCC827(人非小细胞肺癌细胞)5×106cells/瓶×2

正常细胞

人原胚肾转化细胞;293 Ad5 人脐静脉内皮细胞完全培养基 100mL
大鼠热休克蛋白20(HSP-20)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

人羧化不全骨钙素(ucOC)免疫试剂盒 Human Undercarboxylated Osteocalcin,ucOC ELISA Kit

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