Western转移缓冲液(5×),PVDF500ml售后服务使用注意事项
1.微量试剂取用前请离心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4.本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
Western转移缓冲液(5×),PVDF500ml售后服务操作方法
1.悬浮细胞离心(2000rpm离心5min)收集;贴壁细胞用胰酶消化收集用PBS洗涤细胞二次(2000rpm离心5min)收集1~5×105细胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混匀;室温、避光、反应5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer悬浮细胞;
4.请在1 hour内,进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。
A.荧光显微镜观察
1.滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞;
2.对于贴壁细胞来说,也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡;
(1)将细胞于盖玻片上生长,用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡,并设立阴性对照组;
(2)用PBS洗涤细胞两次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混匀;
(4)将上述溶液滴加于盖玻片表面,使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖;
(5)避光、室温反应5 min。
3.将盖玻片倒置于载玻片上,于荧光显微镜下观察激发波长546nm,发射波长647 nm,7-AAD荧光信号呈红色。
B.流式细胞仪分析
用流式细胞仪检测,激发波长Ex=546 nm; 发射波长Em=647 nm。
7-AAD红色荧光建议使用FL3通道检测。
Western转移缓冲液(5×),PVDF500ml售后服务实验步骤
贴壁细胞需用0.25%的胰酶消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加2%的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的胰酶消化时,注意必须彻底清除EDTA:在标记前用1×PBS或1×bindingbuffer洗涤,清除EDTA,以免残余的EDTA与Ca2+螯合,影响Annexin V的结合。
(1)用去离子水将10×Binding Buffer稀释成1×Binding Buffer;
(2)细胞收集。悬浮细胞收集:离心5分钟;贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化收集后(注:胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC的结合),于室温2000rpm离心5~10分钟,收集细胞;
(3)细胞洗涤:用预冷1×PBS(4℃)重悬细胞一次,2000rpm离心5~10分钟,洗涤细胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 悬浮细胞;
(5)Annexin V-FITC标记:加入5μL的Annexin V-FITC混匀后,避光,室温孵育15分钟;
(6)PI标记:上机前5分钟再加入5μL的PI染色。
(7)上机前,补加200μL的1×Binding Buffer。
CCL27 Protein Human 重组人 CCL27 / CTACK 蛋白 (His 标签)
人前列腺上皮细胞完全培养基 100mL
REG3A Others Rat 大鼠 REG3A 人细胞裂解液 (阳性对照)
TSCCA细胞,人舌鳞癌细胞系 乙型副伤寒沙门氏菌 黑化大家鼠肺成纤维细胞;NRm
大鼠脑胶质瘤细胞;C6
MS1(小鼠胰岛内皮细胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H7N2 (A/ruddy turnstone/New Jersey/563/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
人导管癌细胞;ZR-75-30
ENPEP Others Rat 大鼠 ENPEP / Aminopeptidase A (aa 41-945) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
C2C12, 小鼠肌原细胞
RSC, 大鼠雪旺细胞 NCYC 234[IPAZSC 148]细胞 COS-7(SV40 转化的非洲绿猴肾细胞)
人鼻咽癌细胞;CNE-2Z
DLL4 Others Mouse 小鼠 DLL4 / Delta4 人细胞裂解液 (阳性对照)
CD84 Others Mouse 小鼠 CD84 人细胞裂解液 (阳性对照)
人导管瘤细胞;BT-474
Dami 人成巨核细胞白血病细胞
MHCC-97L人肝癌细胞(低转移) MHCC-97L human hepatoma cells (low metastasis) DMEM+10%FBS
TNFSF11 Protein Human 重组人 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 蛋白
人结膜纤维原细胞(HConF)(5×105 ) HAVSMC, 人主动脉平滑肌细胞 Human
大鼠热休克因子1(HSF1)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人胎盘碱性磷酸酶(PLAP)免疫试剂盒 Human Placental alkaline pkosphatase,PLAP ELISA Kit
乙酸激酶(ACK)测试盒 紫外分光光度法 50管/48样
RatTissue-typePlasiminogenActilyse,t-PAELISA试剂盒大鼠组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)ELISA试剂盒规格:96T/48T
HumanLeukotrieneC4,LT-C4ELISA试剂盒人白三烯C4(LTC4)ELISA试剂盒规格:96T/48T
humanoncostatinMreceptor,OSMRELISAKit人制瘤素M受体(OSMR)ELISA试剂盒规格:96T/48T
兔抗糖蛋白抗体(GP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Rat insulin autoantibodies (IAA) ELISA Kit 大鼠胰岛素自身抗体(IAA)ELISA试剂盒
HumanPertussiuToxin,PISAKit 人百日咳毒素(PT)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
Humanglucocorticoidreceptor-β,GR-βELISA试剂盒人糖皮质激素受体β(GR-β)ELISA试剂盒规格:96T/48T
组织超氧化物阴离子化学发光法定量检测试剂盒20次
HumanMycoplasmapneumoniaeantibody,MP-AbELISAKit人肺炎支原体抗体(MP-Ab)ELISA试剂盒规格:96T/48T
Western转移缓冲液(5×),PVDF500ml售后服务鸡转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
鸡主要组织相容性复合体(MHC/B)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
鸡坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
鸡坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装